中华预防医学杂志    2017年09期 重组B亚单位/菌体霍乱疫苗以抗酸剂冲服对2~6岁健康人群的免疫原性和安全性研究    PDF     文章点击量:142    
中华预防医学杂志2017年09期
中华医学会主办。
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黄腾 李荣成 刘德平
HuangTeng,LiRongcheng,LiuDeping
重组B亚单位/菌体霍乱疫苗以抗酸剂冲服对2~6岁健康人群的免疫原性和安全性研究
Study on the immunogenicity and safety of recombinant B-subunit/whole cell cholera vaccine infused with antacids in healthy population at ages of 2-6 years
中华预防医学杂志, 2017,51(9)
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2017.09.010

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投稿日期: 2016-11-02
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重组B亚单位/菌体霍乱疫苗以抗酸剂冲服对2~6岁健康人群的免疫原性和安全性研究
黄腾 李荣成 刘德平     
黄腾 530028 南宁,广西壮族自治区疾病预防控制中心疫苗临床研究所
李荣成 530028 南宁,广西壮族自治区疾病预防控制中心疫苗临床研究所
刘德平 崇左市疾病预防控制中心
摘要: 目的  评价重组B亚单位/菌体霍乱疫苗在2~6岁健康人群中的免疫原性和安全性。方法  于2009年12月至2010年1月,采用发放招募通知的方法,在广西崇左辖区内的各疫苗接种点招募2~6岁儿童家长,共900名。采用随机、双盲、安慰剂对照的设计,将其按2∶1的比例随机接受以抗酸剂冲服霍乱疫苗(试验组)或安慰剂(安慰剂组)。采集入组的前300例(试验组200例,安慰剂组100例)对象首剂免疫前后第49天(±3 d)的血样,用ELISA检测血清中的抗霍乱毒素抗体(抗-CT)与杀弧菌抗体(抗-Vab)几何平均滴度(GMT),最终具有免疫前后配对血清者有266例(试验组177例,安慰剂组89例)。采用t比较两组对象入组时的年龄和免疫前后GMT水平差异;采用χ2检验比较两组性别构成、不良反应发生率以及抗体阳转率的率差差异。结果  900名调查对象中,男、女人数分别为503和397名(试验组为335和265名,对照组为168和132名),入组时试验组年龄为(4.8±1.2)岁,安慰剂组为(4.9±1.2)岁,两组间性别及年龄构成差异均无统计学意义(χ2=0.00,P=1.000;t=0.55,P=0.585)。免疫后试验组抗-CT与抗-Vab的2倍增长率分别为90.96%、57.63%,均高于安慰剂组的15.73%和29.21%(χ2值分别为15.89和3.85,P值均<0.001)。免疫后试验组抗-CT与抗-Vab的GMT水平分别为1∶647.56、1∶16.19,安慰剂组分别为1∶99.49和1∶11.27(t值分别为15.82和3.43,P值均<0.05),试验组较免疫前增长6.63和1.64倍,安慰剂组增长1.11和1.16倍(t'值分别为17.85和4.96,P值均<0.001)。试验组与安慰剂组不良反应发生率分别为37.67%(226/600)、36.67%(110/300),主要不良反应有发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头痛、乏力、过敏、皮疹等,程度主要为轻度(1级)。结论  重组B亚单位/菌体霍乱疫苗,用抗酸剂服法能够产生良好的免疫应答,且有较好的安全性。
关键词 :霍乱菌苗;免疫;药物评价
Study on the immunogenicity and safety of recombinant B-subunit/whole cell cholera vaccine infused with antacids in healthy population at ages of 2-6 years
HuangTeng,LiRongcheng,LiuDeping     
Institute of Vaccine Clinical Research, Guangxi Zhuang Autonomous Region Center for Disease Control and Prevention, Nanning 530028, China
Corresponding author: Huang Teng,Email: huangt24@126.com
Abstract:Objective  To assess the immunogenicity and safety of recombinant B-subunit/whole cell cholera vaccine (rBS/WC) oral cholera vaccine (Ora Vacs) infused with antacids in healthy population at ages of 2-6 years.Methods  Between December 2009 and January 2010, we recruited 900 volunteers aged 2-6 years od through giving out recruitment notice for the eligible children's parents from different vaccination clinics of Chongzuo city in Guangxi Zhuang Autonomous Region. This study was a randomized, double-blind, placebo-controlled trial, and subjects were randomly (2∶1) assigned to receive Cholera vaccine infused with antacids or placebo, and observed for safety. Serum samples of 300 subjects in immunogenicity subgroups (200 for vaccine groups, 100 for control groups) before the 1st dose and 49 d (±3 d) after immunization were collected, and determined for antibody levels against the cholera toxin (anti-CT) and cholera vibriocidal (anti-Vab) with Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), based on which the GMT was calculated. There were 266 cases paired with the serum samples before and after immunization (177 for vaccine groups, 89 for control groups). The comparison of subjects' age at enrollment and the level of GMT before and after immunization between groups were analyzed by t test. The superiority test for the difference between seroconversion rates of vaccine groups and control groups were analyzed by χ2 test.Results  Of 900 subjects enrolled, the number of males and females were 503 and 397 respectively (vaccine groups 335 vs. 265, control groups 168 vs. 132), the average ages of vaccine groups and control groups at enrollment were (4.8±1.2) years and (4.9±1.2) years respectively. There were no significant differences between groups in terms of gender and age (χ2=0.00, P=1.000; t=0.55, P=0.585). The 2 times increase rates of anti-CT and anti-Vab in vaccine groups after inoculation were 90.96% and 57.63% respectively, which were superiority to those of control groups (15.73% and 29.21%), and significant differences were observed between groups (χ2=15.89, χ2=3.85, P<0.001). There were significant differences between vaccine groups and control groups after inoculation in terms of GMTs of anti-CT (1∶647.56 vs. 1∶99.49) and anti-Vab antibodies (1∶16.19 vs. 1∶11.27) (t values were 15.82 and 3.43, respetively; both P values were<0.05), significant differences were observed in the growth rates when compared the GMTs of anti-CT (6.63 vs. 1.11) and anti-Vab antibodies (1.64 vs. 1.16) before inoculation between vaccine groups and control groups (t'=17.85 and 4.96, P<0.001). In terms of safety, the adverse reaction rates in vaccine groups and control groups were 37.67% (226/600) and 36.67% (110/300), respectively,the common adverse reaction including fever, nausea, vomiting, abdominal pain, diarrhea, headache, fatigue, allergies, rash, etc; and the severity degree were mainly for level 1.Conclusion  Ora Vacs infused with antacids could produce an positive effect on immune response and safety.
Key words :Cholera vaccines;Immunity;Drug evaluation
全文

霍乱是由O1群和O139群霍乱弧菌(vibrio cholerate)引起的烈性肠道传染病,属国际检疫传染病。在我国,霍乱属于甲类传染病。典型的临床表现为:急性起病,剧烈的腹泻、呕吐,以及由此引起的脱水、肌肉痉挛,严重者导致循环衰竭和急性肾衰竭[1]。自从1820年霍乱传入我国后,每次世界大流行均波及我国。40多年来,霍乱疫情波及我国29个省份,报病34万例以上,死亡5 500例以上,给我国居民的健康和经济发展带来了巨大的影响[2,3]。为了预防霍乱的发生和流行,中国军事医学科学院生物工程研究所研制开发了口服重组B亚单位/菌体霍乱疫苗(recombinant B-subunit/whole cell cholera vaccine,rBS/WC)肠溶胶囊,由上海联合赛尔生物工程有限公司生产。该疫苗于2000年6月获得新药证书,2003年11月中国国家食品药品监督管理局批准,2004年3月上市。上市以来,在预防霍乱及产毒性大肠杆菌等所致的细菌性腹泻中发挥了很好的作用,但在少数吞咽困难人群特别是儿童中出现吞服时噎塞、呛咳现象。为了扩大疫苗的受益范围,本研究采用摘开胶囊帽倾出内容物以抗酸剂冲服的口服方式服苗,观察2~6岁健康人群服苗后的免疫原性效果和安全性,现将结果报道如下。

对象与方法  

1.对象:  于2009年12月至2010年1月,在广西崇左(该地区既往病例监测显示近十年来无霍乱病例发生,亦未开展过霍乱疫苗普种)辖区内的各疫苗接种点通过向适龄儿童家长发放招募通知的方式招募志愿者,以知情同意、自愿参加为原则。研究对象的纳入标准为:2~6岁,既往无霍乱病史、无霍乱疫苗接种史及疫苗接种禁忌证等情况的健康儿童,共900名,其中600名为试验组,300名为安慰剂组。分组方法如下:受试者到达后随机取号,按先后顺序在事先制定好的随机分配表上获得研究号(号码为001~900,按从小到大的顺序分配,过程中不允许选号、跳号,每个号码只能分配1次,脱落不补)。按照统计师的编盲设计,每30个研究号为1个单元,每个单元内有20个号对应接种试验疫苗、10个号对应接种安慰剂,使试验组与安慰剂组的比例为2∶1。本研究已通过广西疾病预防控制中心伦理审查委员会的审查批准(批号:20091127)。所有受试者的监护人均签署了知情同意书。

2.疫苗:  试验疫苗为rBS/WC由上海联合赛尔生物工程有限公司生产。规格为每粒胶囊装量240 mg,含霍乱菌体5.0×1010个,重组霍乱毒素B亚单位1 mg。辅料为药用乳糖和硬脂酸镁。安慰剂由上海联合赛尔生物工程有限公司生产,胶囊外观与疫苗所用胶囊一致,但无活性成分,只含赋形剂乳糖和硬脂酸镁。抗酸剂由上海联合赛尔生物工程有限公司生产,含碳酸氢钠、碳酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、香精、阿斯巴甜、糊精。所有产品均为中国食品药品检定研究院检定合格产品,均在有效期内使用。疫苗在到达现场前已进行了重新包装,为盲态疫苗,外观完全一致,以外包装上贴的疫苗编号(编号范围:001-900)进行识别。

3.免疫程序及接种方法:  受试者按照"0-7-28 d"的程序进行免疫,每次1粒,共接种3剂;每次打开1粒rBS/WC肠溶胶囊的胶囊壳,将内容物倒出,溶解于75 ml抗酸剂溶液中,服用。

4.样本采集:  入组的前300例(研究号:001-300)为免疫原性亚组受试者(其中试验组200例,安慰剂组100例),需要采集首剂免疫前和免疫后第49天(±3 d)的血样各3 ml,1 810×g离心5 min后取上清分装至血清管,-20 ℃条件下保存在现场。样本采集完毕后共有266例(试验组177例,安慰剂组89例)具有免疫前后配对血清,将配对血清统一送至中国食品药品检定研究院(中检院)进行血清抗霍乱毒素抗体(antibody against cholera toxin,抗-CT)和杀弧菌抗体(antibody against vibriocidal,抗-Vab)的抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)的检测。检测仪器及试剂均由中检院提供,试剂均在有效期内使用。

5.检测方法:  (1)抗-CT GMT:采用ELISA法,用国家标准品的霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)包被后,样品血清倍比稀释。用酶标仪测定结果:以空白孔调零,在波长450 nm下分别测定各孔吸光度值(A)。S/N=标本A值/阴性对照A值,S/N≥2.1为阳性,S/N<2.1为阴性,阴性对照小于0.05时以0.05计。(2)抗-Vab GMT:采用氯化三苯四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)显色微量法检测。在96孔U型板中将样品血清由1∶2倍比稀释至1∶16,将补体(北京绿生源科技有限公司提供)10×d稀释与1.8亿/ml菌悬液1∶1的混合液加入样品血清倍比稀释孔中培养30 min,每孔加入TTC显色(北京化学试剂公司提供)过夜。结果判定:以未呈紫红色孔的最高稀释度为杀弧菌抗体滴度。有效指标:以免疫前后抗体滴度增长倍数≥2,判定为抗体阳转(免疫成功)[4,5,6,7,8,9]

6.安全性观察:  受试者每次服苗后需在接种现场留观30 min接受即时反应观察。离开现场后以受试者主动报告及填写日记卡的方式,结合研究医生的定期随访收集首剂至全程免疫后21 d内的任何不良事件。以全程免疫后21 d的不良事件作为安全性评价的终点。疫苗接种后不良反应按国家食品药品监督管理总局颁布的《预防用疫苗临床试验不良反应分级标准指导原则》进行级别及程度的判定,并评估与疫苗的相关性。胃肠道反应主要观察接种疫苗后发生呕吐、腹泻、腹痛及其他的胃肠反应情况。其他全身反应主要观察发热、变态反应、头痛、疲劳、乏力等。

7.质量控制:  负责机构于研究开展前制定了较为详尽的质量控制计划,内容涵盖各关键环节以及质控要点,由质量控制员在整个疫苗临床试验过程中进行全程质控。主要研究者需根据方案和《药物临床试验质量管理规范》,制定科学、规范、高效、可行的管理制度与标准操作规程。此外,监查会按一定的时间规律对现场进行监查。监查时要核对原始病历与病例报告表上的信息是否相符,如发现与原始病历不一致或未及时完成填写,则要督促研究者修改或尽快完成。监查员要检查研究者对方案(或方案修正案)的依从情况,评价知情同意的过程、试验用疫苗的运输储存情况、试验用文件及试验的进展情况等等,并撰写监查报告。

8.统计学分析:  采用Epidata 3.0软件建立数据库,双人录入核对无误后,采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。计算受试者抗-Vab在免疫前后相比升高2倍的抗体阳转率,抗-CT在免疫前后相比升高2倍以及升高4倍的抗体阳转率,抗体GMT水平和平均增长倍数;计算不良反应发生率。受试者入组时的年龄符合正态分布,采用± s表示;采用t检验比较两组对象年龄及免疫前后GMT水平差异;采用χ2检验比较两组间的性别构成、不良反应发生率及抗体阳转率差异。以P<0.05为差异有统计学意义。

结果  

1.受试者入组及完成情况:  900名研究对象均完成了首剂疫苗接种,其中试验组和安慰剂组分别为600和300名,男、女人数分别为503和397名(试验组为335和265名,对照组为168和132名),入组时试验组年龄为(4.8±1.2)岁,安慰剂组(4.9±1.2)岁,两组间性别及年龄构成差异无统计学意义(χ2=0.00,P=1.000;t=0.55,P=0.585)。试验组和安慰剂组对象完成接种第二剂的比例分别为94.5%(567例)和95.7%(287名);完成全程免疫的比例分别为92.83%(557名)和93.67%(281名);依从性93.11%(838名)。脱落62名,其中撤销知情同意15名,违背方案退出24名,非严重不良事件退出22名,失访1名。300名完成了首剂免疫前血样采集,266名完成免疫后血样采集,免疫原性依从性为86.67%,其中试验组为88.50%(177名),安慰剂组为89.00%(89名)。

2.免疫原性评价:  试验组和安慰剂组免疫前抗-CT的GMT分别为1∶93.83、1∶99.87,差异无统计学意义(t=0.62,P=0.534)。免疫前抗-Vab的GMT分别为1∶10.20、1∶9.65,差异无统计学意义(t=0.68,P=0.498)。(1)免疫后抗体阳转率:全程免疫后试验组抗-CT与抗-Vab的2倍增长率分别为90.96%、57.63%,抗-CT的4倍增长率为78.53%,均高于安慰剂组(P值均<0.001)。详见表1。(2)免疫后抗体GMT水平:免疫后试验组的抗-CT与抗-Vab抗体GMT水平分别为1∶647.56、1∶16.19,较免疫前增长6.63和1.64倍;与安慰剂组相比差异均有统计学意义。详见表2

表1霍乱疫苗试验组和安慰剂组对象免疫后抗-CT和抗-Vab抗体倍数增高的增长率
表2霍乱疫苗试验组和安慰剂组免疫后抗-CT和抗-Vab的GMT及其增长倍数情况(1:)

3.安全性评价:  900名受试者经过首剂接种至第3剂接种后30 d的随访观察,共报告336名至少发生1次与疫苗相关的不良反应,试验组与安慰剂组不良反应发生率分别为37.67%、36.67%(χ2=0.09,P=0.827)主要收集到的不良反应有发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头痛、乏力、过敏、皮疹等,程度主要为轻度。未收集到任何严重不良事件,未观察到不良反应发生率随剂次增加而增高的现象。详见表3

表3霍乱疫苗试验组和安慰剂组免疫后观察期内不良反应情况

讨论  多项研究证实rBS/WC能产生良好的免疫应答。鉴于目前我国霍乱的发病率处于相当低的水平,较难通过短期的观察评估霍乱疫苗的保护效果,因此抗霍乱毒素抗体和杀弧菌抗体作为抗霍乱的可评价的可靠替代指标,其2倍增长视为阳转的指标已被国际公认[4,5,6,7,8,9]
        本研究中,试验组血清抗霍乱毒素抗体和血清抗杀弧菌抗体的结果,与抗酸剂服法的国外已上市同类型疫苗结果类似,如在秘鲁进行的2~6岁儿童和成年人的临床试验,试验组的血清抗霍乱毒素抗体2倍增长率近90%,4倍增长率约为70%,试验组血清杀弧菌抗体2倍增长率为55%(安慰剂组为6%)[8]。Begue等[13]研究报道,rBS/WC免疫后血清抗霍乱毒素抗体的2倍增长率约90%,杀弧菌2倍增长率为49%。有研究报道,rBS/WC免疫后受试者的血清抗毒素抗体的2倍增长率为89%,杀弧菌抗体的2倍增长率为44%~47%。而无论是在霍乱流行区还是非流行区,该疫苗的6个月的保护效率为85%,1和2年的保护效率分别为62%和50%[8,9,10,11,12,13,14]
        安全性方面,试验组不良反应发生率与安慰剂组不良反应发生率相比较,差异无统计学意义。其中主要发生的不良反应为发热,略高于既往临床研究文献报道[8,9,10,11,12,13,14],差异的原因可能与受试者年龄及研究实施过程中的质量控制标准有关。我国所采用的发热不良反应分级标准不同于国外,如美国食品和药物管理局"纳入预防性疫苗临床试验的健康成人和青少年志愿者的不良反应分级标准"的指导原则中对于轻度(1级)发热定义为口腔温度为38.0~38.4 ℃,本试验按照我国要求定义轻度发热为腋下体温37.1~37.5 ℃或口腔温度为37.7~38.5 ℃[15],因此收集的试验组和安慰剂组轻度发热不良反应的发生率分别为28.17%和26.00%。另外,本研究开展时正值冬春季节,试验对象选取2~6岁幼儿较成年人容易偶合发热等不良反应。研究期间收集到的不良反应有发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头痛、乏力、过敏、皮疹等,程度主要为轻度,安全性良好。
        需要说明的是,该疫苗在最初研发时即为冻干粉剂型,需用抗胃酸剂冲溶成水液服用,并于1986—1998年顺利完成临床试验,证实了该疫苗水剂服用法的良好效果。后因觉得供应时需配备抗酸剂包装不够方便,而改为肠溶胶囊剂型。在该胶囊剂型上市销售5年后,再次向国家食品药品监督管理总局递交补充申请,拟增加2~6岁儿童的使用方法(摘开胶囊帽倾出内容物以抗酸剂冲服的口服方式服苗),属于已上市疫苗因"变更用法用量及扩大适用人群范围但不改变给药途径"而开展的Ⅲ期补充临床试验。
        综上所述,本次研究用的rBS/WC,用抗酸剂服法能够产生良好的免疫应答,且有较好的安全性。

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