中华预防医学杂志    2017年09期 云南省玉溪市首例输入2型登革病毒分子特征分析    PDF     文章点击量:134    
中华预防医学杂志2017年09期
中华医学会主办。
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文章信息

范芝宏 郭晓芳 李六九 魏如清 李文 普静波 杨明东
FanZhihong,GuoXiaofang,LiLiujiu,WeiRuqing,LiWen,PuJingbo,YangMingdong
云南省玉溪市首例输入2型登革病毒分子特征分析
Molecular characteristics of the first imported case of dengue-2 virus at Yuxi city in Yunnan Province
中华预防医学杂志, 2017,51(9)
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2017.09.016

文章历史

投稿日期: 2016-09-08
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云南省玉溪市首例输入2型登革病毒分子特征分析
范芝宏 郭晓芳 李六九 魏如清 李文 普静波 杨明东     
范芝宏 653100 玉溪市疾病预防控制中心慢性病地方病控制科
郭晓芳 云南省虫媒传染病防控研究重点实验室 云南省虫媒病毒研究中心 云南省寄生虫病防治所虫媒病毒性疾病防制科
李六九 653100 玉溪市疾病预防控制中心慢性病地方病控制科
魏如清 653100 玉溪市疾病预防控制中心慢性病地方病控制科
李文 通海县疾病预防控制中心传控科
普静波 通海县疾病预防控制中心传控科
杨明东 云南省虫媒传染病防控研究重点实验室 云南省虫媒病毒研究中心 云南省寄生虫病防治所虫媒病毒性疾病防制科
摘要:
关键词 :登革热;登革热病毒;分子流行病学
Molecular characteristics of the first imported case of dengue-2 virus at Yuxi city in Yunnan Province
FanZhihong,GuoXiaofang,LiLiujiu,WeiRuqing,LiWen,PuJingbo,YangMingdong     
Yuxi Center for Disease Control and Prevention, Yuxi 653100, China
Corresponding author: Yang Mingdong, Email: quanjueyang@163.com
Abstract:
Key words :Dengue;Dengue virus;Molecular epidemiology
全文

登革热是由白纹伊蚊和埃及伊蚊传播的急性病毒性虫媒传染病,登革病毒(dengue virus,DENV)共有4个血清型,其中DENV-2较易引起重症病例和死亡病例的发生[1]。近年来,广东、福建、浙江和江苏等省均发生过因输入性病例引起的本地登革热暴发疫情,其中2013和2015年在云南省边境地区也先后出现输入性登革热暴发疫情[2,3,4]。本研究于2015年对玉溪市登革热疑似病例开展了监测,检测发现了1例DENV-2感染输入病例,现对该例分子流行病学特征进行如下分析。

一、对象与方法  

1.对象:  男,19岁,就读于马来西亚吉隆坡英迪大学,2015年12月20日发热;12月21日回国(玉溪市通海县),以疑似登革热病例被收治在通海县人民医院;主要临床症状为:高烧(39.6 ℃),头晕及一过性眼眶疼痛,皮疹、恶心、呕吐、伴短暂性结膜充血。

2.血清标本采集:  依据《登革热诊断标准》对该病例的急性期全血和血清进行采集,并采用美国Cortez公司生产的One Step Dengue NS1 RapiDipTM InstaTest (Serum)试剂盒(批号:TM1005)检测登革病毒非结构蛋白抗原1(dengue virus non-structural protein,DENV NS1),并将剩余血清标本置于-70 ℃冰箱保存。

3. DENV特异核酸检测:  采用德国QIAGEN公司生产的QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒提取血清中的DENV RNA,参照文献[5]合成cDNA;DENV特异核酸检测采用半巢氏RT-PCR方法,引物序列和实验方法参照国家登革热诊断标准WS216-2008[6];在试验过程中,均设有DENV阳性、阴性对照。

4. E基因扩增及其序列测定:  采用相应的DENV E基因引物进行扩增[7];将扩增阳性的PCR产物送广州华大基因科技有限公司进行测序和序列拼接。并将测序结果在美国NCBI网站进行BLAST比对。

5.序列同源性分析:  参照文献[7]在GenBank中选出15个国家和地区的26条DENV E基因序列和本研究DENV-2 E基因序列,采用Mega 5.05软件进行E基因序列比对,并用最大似然法构建系统进化树,Bootstrap=1 000。

二、结果  

1.基本情况:  该病例DENV NS1抗原为阳性,且疟疾镜检血涂片未见疟原虫,疟原虫检测胶体金法结果为阴性,乙型脑炎病毒抗体检测结果为阴性。该病例家住玉溪市通海县纳古镇,于2015年12月20日在马来西亚所就读学校内出现发热(38.5 ℃)、头痛、乏力,发病前有蚊虫叮咬史,21日晚回国到通海县人民医院就诊,期间未在其他公共场所停留,无本地随行及陪同人员。

2.核酸检测结果:  DENV血清型为DENV-2阳性,其中第一轮PCR阳性产物测序得到491 bp序列,BLAST比对与2004和2010年印度尼西亚DENV-2(genotype: cosmopolitan)流行株TB16i和MKS-WS80(GenBank:AY858036,KC762680)相似性最高(98%)。E基因扩增得到1 485 bp序列,经BLAST比对与2010和2012年印度尼西亚DENV-2(genotype: Cosmopolitan)流行株D2/IDN/Bali_020/2010和SKB-CM109(均为E基因)(GenBank:KM216693,KF052661)相似性最高(99%)。与2015年云南景洪市流行的DENV-2 E基因核苷酸相似性为93.9%,与2015年云南瑞丽市流行的DENV-2 E基因核苷酸相似性为91.0%~91.4%。

3. DENV E基因系统进化分析:  共26条参考序列分别位于各自的6个基因型的进化分支,本研究得到的DENV-2病毒株序列位于由东南亚国家的DENV-2 E基因组成的世界基因型(cosmopolitan genotype)的进化分支。详见图1

图12015年输入病例DENV-2 E基因序列(1 485 bp)系统进化分析

三、讨论  通海是云南省蒙古族聚居地,地处滇中腹地,境内外交通便捷,随着经贸往来以及旅游业的发展,前往东南亚和云南省边境地区的人员众多,输入病例风险随之增加。随着废旧轮胎回收加工业的快速发展、园林苗圃面积扩大、家庭种养花草的增多,适宜伊蚊孳生的场所日渐增多,而且以往调查也发现该县中心城区具有白纹伊蚊的分布,一旦有传染源输入,特别是病毒血症期患者进入,很可能引起类似2013和2015年在我省边境地区由输入病例引起的西双版纳州景洪市和临沧市耿马县暴发的登革热疫情[3,4]
        本例输入病例急性期血清标本经过登革病毒特异核酸检测和基因序列分析确定为DENV-2 (Cosmopolitan基因型),与已知印度尼西亚近几年流行株高度相似,而与云南省景洪市2015年流行的DENV-2相似性较低。结合流行病学调查,证实该病例感染DENV来源于东南亚国家,这是云南省首次从马来西亚输入病例中检测到该基因型的DENV。该基因型除了在2014年我国的广东[8]和台湾[9]流行,近年还在东南亚广泛流行[7,10,11]
        鉴于该输入病例感染的DENV在东南亚广泛流行,当地卫生部门应进一步加强登革热输入病例监测及时发现传染源并做好规范管理,疾病预防控制机构加强登革热媒介监测和废旧轮胎收购、加工、储存及销售等各个环节的规范管理指导,防止因输入病例引起二代病例的发生和本地流行。

参考文献
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