中华预防医学杂志    2018年04期 食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型研究     文章点击量:298    
中华预防医学杂志2018年04期
中华医学会主办。
0

文章信息

白瑶 王伟 闫琳 杨舒然 闫韶飞 董银苹 赵彬丞 赵洋洋 徐进 胡豫杰 李凤琴
Baiyao,WangWei,YanLin,YangShuran,YanShaofei,DongYinping,ZhaoBincheng,ZhaoYangyang,XuJin,HuYujie,LiFengqin
食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型研究
Molecular typing characterization of food-borne methicillin-resistant Staphylococcus aureus in China
中华预防医学杂志, 2018,52(4)
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2018.04.007

文章历史

投稿日期: 2017-12-05
上一篇:中国四省份禽肉中耶尔森菌的耐药性及其耐药基因研究
下一篇:中国六省份零售整鸡中沙门菌血清型分布和耐药性特征研究
食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型研究
白瑶 王伟 闫琳 杨舒然 闫韶飞 董银苹 赵彬丞 赵洋洋 徐进 胡豫杰 李凤琴     
白瑶 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
王伟 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
闫琳 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
杨舒然 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
闫韶飞 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
董银苹 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
赵彬丞 北京农学院食品科学与工程学院
赵洋洋 北京农学院食品科学与工程学院
徐进 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
胡豫杰 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
李凤琴 100021 北京,国家食品安全风险评估中心 卫生部食品安全风险评估重点实验室
摘要: 目的  分析食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对常用抗生素的耐药情况及分子分型特征,并评价分子分型方法。方法  21株MRSA菌株来自2012年全国污染物监测网(凉拌菜分离3株,牛奶分离1株,糕点分离2株,米饭分离1株,凉面分离1株,酱牛肉分离1株,水饺分离1株,盒饭分离1株,沙拉分离1株,生猪肉9株),采用微量肉汤稀释法测定菌株对11种抗生素的耐药性,并采用PCR方法对菌株进行扩增,获得多位点序列分型(MLST,ST型)、spa分型,通过eBURST软件获得克隆簇(CC),登陆http://www.mlva.net网站获得多位点可变数目串联重复序列(MLVA,MT型)和MLVA复合体(MC);采用SmaⅠ-PFGE获得菌株的PFGE带型;应用Simpson区分系数(DI值),评价各方法的分型能力,以发现适合MSRA最强分辨率的分型方法。结果  所有MRSA菌株均为多重耐药株(耐3类及以上抗生素),对苯唑西林、苄青霉素、克林霉素和红霉素均耐药,对四环素、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和庆大霉素的耐药率分别为71.4%(15株)、47.6%(10株)、42.9%(9株)和28.6%(6株),此外有1株菌对左氧氟沙星、莫西沙星和利福平均耐药。21株菌株可分为6种ST型、7种spa型、9个MLVA型和19个PFGE带型,PFGE、MLVA、spa及MLST分型方法的DI值依次为0.99、0.80、0.73和0.61。分离自生猪肉的9株MRSA被识别为CC9-ST9-t899-MT929-MC2236,PFGE带型Ⅴ,为主要的MRSA流行克隆,此外,有2株MRSA被识别为CC59-ST338-t437-MT621-MC621,PFGE带型Ⅳ,不同的流行克隆具有特定的耐药谱。结论  食源性MRSA多重耐药普遍存在,不同流行克隆具有特定的耐药谱,MLVA可作为处理MRSA所致突食源性疾病的首选溯源分型工具。
关键词 :抗甲氧西林金黄色葡萄球菌;分子分型;抗药性;生猪肉
Molecular typing characterization of food-borne methicillin-resistant Staphylococcus aureus in China
Baiyao,WangWei,YanLin,YangShuran,YanShaofei,DongYinping,ZhaoBincheng,ZhaoYangyang,XuJin,HuYujie,LiFengqin     
Key Lab of Food Safety Risk Assessment, Ministry of Health, China National Center for Food Safety Risk Assessment, Beijing 100021, China
Corresponding author: Li Fengqin, Email: lifengqin@cfsa.net.cn
Abstract:Objective  To analyses the antimicrobial resistance and molecular characterization of 21 MRSA isolates cultured from retail foods from different provinces in China, and evaluate the molecular typing methods.Methods  Twenty-one MRSA isolates were obtained from national foodborne pathogen surveillance network in 2012 (Chinese salad, n=3; milk, n=1; cake, n=2; rice, n=1; cold noodle, n=1; spiced beef, n=1; dumpling, n=1; packed meal, n=1; salad, n=1; raw pork, n=9). The antimicrobial resistance of 21 strains to 12 antimicrobial agents was tested by broth dilution method. Polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing were performed to obtain the genetic types of MLST (ST) and spa typing. The clonal complex (CC) was assigned by eBURST soft and the MLVA type (MT) and MLVA complex (MC) were identified via the database of the MLVA website (http://www.mlva.net). SmaI pulsed-field gel electrophoresis (SmaⅠ-PFGE) was also carried out to obtain the PFGE patterns of 21 strains. The genetic diversity and discriminatory power of typing were calculated by the Simpson's index of diversity (diversity index, DI) to find out the best genotyping method for MRSA.Results  All MRSA isolates showed multi-drug resistance(MDR), and were resistant to oxacillin, benzylpenicillin, clindamycin and erythromycin, and 71.4% (15/21), 47.6% (10/21), 42.9% (9/21) and 28.6% (6/21) of the MRSA isolates were resistant to tetracycline, ciprofloxacin, trimethoprim/sulfamethoxazole and gentamicin, respectively. Moreover, one strain was found to be resistant to all three antimicrobials of levofloxacin, moxifloxacin and rifampicin. Great diversity was found in these food-associated MRSA (6 STs, 7 spa types, and 9 MTs). PFGE patterns were more diverse than those of other three molecular typing methods (19 pulse types). The index of diversity (DI) of PFGE, MLVA, spa typing and MLST was 0.99, 0.80, 0.73, and 0.61, respectively. Among the MRSA isolates, CC9-ST9-t899-MT929-MC2236 (PFGE Cluster Ⅴ) was the most prevalent clone, which were all cultured from raw pork (9 isolates). Besides, two MRSA were identified as CC59-ST338-t437-MT621-MC621 (PFGE Cluster Ⅳ). Different clone had their own resistance spectrum profiles.Conclusion  The food-borne MRSA isolates were all MDR in this study. Different clones had their own resistance spectrum profiles. MLVA represented a promising tool for molecular epidemiology tracing of MRSA in foodborne disease events.
Key words :Methicillin-resistant Staphylococcus aureus;Molecular typing;Drug resident;Raw pork
全文

近年来,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染已成为世界各国重要的公共卫生问题,造成了严重的经济和疾病负担[1,2,3,4,5]。最初MRSA感染主要与住院治疗和临床手术有关,即医院获得型MRSA(hospital-acquired MRSA, HA-MRSA),然而近年来社区获得型MRSA(community-acquired MRSA,CA-MRSA)的出现及其对医疗机构和人群的感染也逐渐成为各国关注的热点[6,7]。1999年,美国发生了4名儿童死于CA-MRSA的感染事件[8]。加拿大人感染CA-MRSA占全部感染MRSA的比率从2007年的19.5%上升到了2009年的31.9%[9]。提示MRSA所致感染有从医院获得型逐渐向社区获得型转化的趋势。
        由于金黄色葡萄球菌可产生肠毒素,是食源性疾病发生的主要原因之一[10],目前已有大量从动物性食品及其制品中分离到MRSA的报道[11,12,13]。鉴于MRSA普遍耐药,目前临床上只能用万古霉素、替考拉宁等少数几种抗生素来治疗MRSA感染[14]。因此,对食品中MRSA进行分子分型分析,对有效控制食品中MRSA污染及流行具有重要意义。国际上已有针对食源性MRSA开展的分子分型研究报道[15,16],国内虽有关于食源性MRSA的报道,但大部分局限于一种或两种分型方法[17,18],本研究对2012年食源性致病菌监测网收集的食源性MRSA菌株进行四种分子分型研究,获得MRSA菌株的分子分型特征和主要流行菌株的型别,为我国开展MRSA所致食源性疾病突发事件溯源分析提供重要的实验室依据。同时探讨MRSA菌株的抗生素耐药谱与分子分型之间的关系,为研究其耐药机制提供依据,进而指导食品生产环节抗生素的合理应用,从根本上控制MRSA对食品的污染和对人群的健康危害具有重要意义。

材料与方法  

1.菌株:  本研究采用的21株MRSA菌株2012年全国食品污染物监测网[19],该监测网设有覆盖全国的食品污染物和有害因素监测点为2 656个。21株MRSA菌株主要从凉拌菜分离3株,牛奶分离1株,糕点分离2株,米饭分离1株,凉面分离1株,酱牛肉分离1株,水饺分离1株,盒饭分离1株,沙拉分离1株,生猪肉分离9株。药敏质控菌株金黄色葡萄球菌(ATCCR29213)、PFGE相对分子量沙门菌Salmonella serotype Braenderup H9812均为本实验室保存。

2.仪器与试剂:  高通量DNA Engine Tetrad 2 PCR仪、Sub-CellR Model 96 Cell电泳仪、Gel Doc XR凝胶成像系统和脉冲场凝胶电泳仪PFGE(美国Bio-Rad公司);脑心浸液琼脂和脑心浸液肉汤购自北京陆桥技术股份有限公司,细菌基因组提取试剂盒(DP302)、100 bp DNA标准(MD109)和PCR酶(KT201-02)购自天根生化科技(北京)有限公司,Xba Ⅰ酶和Sma Ⅰ酶(美国New England Biolabs公司),GeneScan 1200 LIZ内标购自美国Applied Biosystems公司,试验用抗生素均购自美国Sigma公司。

3.引物:  金黄色葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和多位点可变数目串联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)分型引物合成及PCR产物纯化、测序均由上海英俊生物技术有限公司。

4.抗生素敏感性试验:  根据美国临床和实验室标准委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)2015版推荐的微量肉汤稀释法[20],以金黄色葡萄球菌ATCCR29213作为质控菌株,测定苄青霉素(benzylpenicillin,BEN)、苯唑西林(oxacillin,OXA)、庆大霉素(gentamicin,GEN)、环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)、左氧氟沙星(levofloxacin,LEV)、莫西沙星(moxifloxacin,MOX)、红霉素(erythromycin,ERY)、克林霉素(clindamycin,CLI)、四环素(tetracycline,TET)、利福平(rifampicin,RIF)、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(trimethoprim/sulfamethoxazole,SXT)、万古霉素(vancomycin,VAN)11种抗生素对受试菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。质控菌株29213操作同上。结果判定:通常将无细菌生长的抗生素最低浓度定位MIC,对含甲氧苄啶或磺胺类等抗生素的结果,以细菌生长数量较生长对照孔有80%及以上的减少定为MIC。参照美国临床和实验室标准委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)的解释标准,将结果判定为:敏感(S)、中介(I)、耐药(R)。多重耐药(multi-drug resistance,MDR)的判定标准为菌株对3类及以上的抗生素表现为耐药,该菌株即为MDR。

5.菌株活化和DNA制备:  菌株划线接种脑心浸液琼脂平板,(37±1)℃培养18~24 h后,挑取单菌落分别接种于脑心浸液肉汤和脑心浸液琼脂平板,(37±1)℃培养18~24 h。按照试剂盒说明书的方法进行操作,提取实验菌株的基因组DNA。

6.MLST分型:  根据金黄色葡萄球菌的7个管家基因序列(表1),用PCR方法进行扩增[21]。PCR产物送公司进行纯化和测序,将所获得的7个管家基因序列导入BioNumerics 7.6软件(比利时Applied Math)分析其等位基因号和序列型(sequence type,ST)。用eBURST软件(http://eburst.mlst.net)将本研究所鉴定的ST型与数据库中所有目前国际上报道的ST型进行比较以获得其克隆簇(clonal complex,CC)。

表1多位点序列分型中管家基因引物序列及预期片段大小

7.spa分型:  用PCR方法进行spa分型[22]。引物序列为SpaF:5'-GCTTTTGCAATGTCATTTACTG-3',SpaR:5'-AGACGATCCTTCGGTGAGC-3'。PCR产物送公司进行纯化和测序,获得的序列导入BioNumerics 7.6软件进行分析,获得各菌株的spa型。

8.MLVA分型:  根据MLVA(http://www.mlva.net)网站公布的8个数目可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR)位点的引物序列和方法(表2),采用多重PCR方法进行扩增[23]。PCR产物送公司测序分析,以GeneScan 1200 LIZ内标作为片段大小标准,将测序结果导入GeneMarker软件进行扩增片段大小的分析,实验所得的数据与MLVA数据库数据中Saureus_MLVA_allele_size进行比对,获得每个等位基因的重复数。8个等位基因的重复数按照VNTR09-01、VNTR61-01、VNTR61-02、VNTR67-01、VNTR21-01、VNTR24-01、VNTR63-01、VNTR81-01的顺序连成一串即MLVA谱,如14-2-1-3-2-11-6-5,将其提交至http://www.mlva.net网站获得对应的MLVA型(MT)和MLVA复合体(MLVA complex,MC),获得的MLVA谱导入BioNumerics 7.6软件进行聚类分析。

表221株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌8个数目可变串联重复序列位点的引物序列情况

9.PFGE分型:  参照文献[24]的方法,用新鲜培养的金黄色葡萄球菌菌落制备菌悬液,取200 μl菌悬液加入2 μl的葡萄球菌溶菌素(1 mg/ml)和10 μl的溶菌酶(20 mg/ml),55 ℃水浴20 min破壁后,加入200 μl 1% SeaKem Gold琼脂糖制备plug。实验菌株用限制性内切酶Sma Ⅰ 30 ℃酶切至少3 h,H9812用Xba Ⅰ 37 ℃酶切至少2 h。使用CHEF-mapper XA型脉冲场凝胶电泳仪和0.5×TBE进行电泳。设置电泳参数,low MW-49kb,high MW-450kb,电泳时间19 h。用GEL DOC XR凝胶成像系统拍摄图像。所获电泳图谱用BioNumerics 7.6软件进行处理,绘制菌株间关系的树状图,判定菌株间的亲缘关系,方法采用UPGMA(unweighted pair-group mean arithmetic)进行聚类分析,菌株之间的差异程度用Diec相似性系数来确定。

10.分型方法的分辨能力:  采用Simpson区分系数(index of diversity)[23],评价各方法的分型能力,以发现适合MSRA最强分辨率的分型方法,公式如下:,其中s为总分型数;nj为第j个型中含有的菌株数;N为菌株总数。

结果  

1.抗生素敏感性试验结果:  21株菌均为多重耐药,对苯唑西林、苄青霉素、克林霉素和红霉素均表现为耐药,对四环素、环丙沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑和庆大霉素耐药等额菌株分别有15、10、9和6株,此外有1株MRSA菌株对左氧氟沙星(MIC=32 μg/ml)、莫西沙星(MIC>16 μg/ml)和利福平(MIC=16 μg/ml)等均耐药。所有菌株对万古霉素均敏感。详见表3

表321株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对11种抗生素的耐药情况

2.MLST分型:  21株MRSA共识别到6个ST型,获得4个克隆簇。其中有13株菌为ST9型,等位基因谱是3-3-1-1-1-1-10,为优势序列型,与ST903型(1株)均属于CC9,为优势克隆簇;ST59和ST338型各有2株菌,均属于CC59;2株ST630型属于CC8;ST10型有1株菌,属于CC10。详见图1图2

图121株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的eBURST分析结果
图221株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PFGE聚类分析图及MLVA、spa分型、MLST和耐药谱

3.spa分型:  21株MRSA菌株共识别到7个spa型,包括2个流行克隆和5个散发克隆。流行克隆为t899(9株)和t437(7株)型;散发克隆为t030、t172、t337、t1244和t4549型,各有1株MRSA。详见图2

4.MLVA分型:  21株MRSA共识别到9个MLVA型(图2)。其中主要的MLVA型为MT 929和MT621,分别有9和4株MRSA;其次有2株MRSA的MLVA型为MT622;其他6个MLVA型各有1株。有8个MLVA型的20株MRSA被指定为4个MLVA复合体,其中以MC2236(9株)和MC621(8株)为主,分别含有1和4个MLVA谱;其次为MC8(2株),含有2个MLVA谱;此外,1株MT3054型的MRSA菌株被指定为与MC621关系最近的MLVA复合体,即NMC621;而1株MT3028型的MRSA菌株未能识别到MLVA复合体,与其他MLVA复合体的关系均较远,详见图3

图321株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的MC聚类分析图

5.PFGE分型:  21株MRSA菌株共得到19个PFGE带型,以同源性72%作为截断值(cut-off)的阈值,可将21株MRSA菌株分为5个簇(即Ⅰ~Ⅴ),其中Ⅳ和Ⅴ分别含有9株菌,Ⅰ~Ⅲ分别各有1株菌。详见图3

6.分型方法的分辨能力比较:  PFGE、MLVA、spa及MLST法的分型能力区分系数DI值依次为0.99、0.80、0.73和0.61。

7.主要MRSA流行克隆及其耐药谱:  由图3可见,9株分离自生猪肉的MRSA具有相同的克隆簇、ST型、spa型和MLVA型,即CC9-ST9-t899-MT929-MC2236,同时也具有相近的PFGE带型(Ⅴ),为主要的流行克隆,其对应的耐药谱有2种,即BEN-OXA-CIP-ERY-CLI-TET-SXT和BEN-OXA-GEN-CIP-ERY-CLI-TET-SXT;有2株为CC59-ST338-t437-MT621-MC621(PFGE带型Ⅳ),其对应的耐药谱有两种,BEN-OXA-ERY-CLI和BEN-OXA-ERY-CLI-TET;其他1株则具各自的分型特点。

讨论  金黄色葡萄球菌毒力和耐药基因包括可移动遗传元件如质粒、前噬菌体和毒力基因岛等,可通过水平传递在食品等环境介质以及人体中传递给其他致病菌,给食品安全和人类健康带来严重危害[25,26]。由于MRSA对抗生素的耐药性,且在环境中具有较强的适应和定植能力,一直以来受到各国政府的高度关注。本研究21株食源性MRSA菌株均为多重耐药,人一旦感染上述菌株,将造成严重的经济和社会负担[27,28]。因此,掌握MRSA菌株的流行趋势和遗传特征,对预防和控制MRSA的传播具有重要意义。目前,国内已有大量分子分型技术应用于耐药致病菌流行特征研究的报道[29,30]
        CC9是本研究的优势克隆簇,据报道,CC9在全球范围均有流行,而CC59目前包括我国在内的亚太地区已逐渐成为仅次于CC9的CA-MRSA优势克隆簇[7],CC8主要在美国和加拿大等地流行[7,31,32],我国仅在HA-MRSA中有检出的报道[33],食品中较少见,CC10属于较为罕见的克隆簇,在国内首次分离到该克隆簇。本研究从即食食品和生猪肉中同时分离到ST9型的MRSA,且生猪肉来源的MRSA具有相同的克隆簇、ST型、spa型和MLVA型,提示同一食品来源的菌株其基因型可能也相同。研究发现,ST9型MRSA主要来源于猪、牛等动物性食品,是亚洲地区包括中国在内食源性动物中MRSA主要的流行株,而欧美地区食源性动物中MRSA流行株主要以ST398为主[34]。Wang等[35]于2008—2012年在陕西从收集的1 979份零售食品中分离到23株MRSA,主要来自生牛奶、猪肉、禽肉等动物性产品及其制品,其中有52.2%的MRSA为ST9型,这与本研究基本一致,提示ST9型MRSA极有可能已经在养殖动物和食品消费链间发生了传递。此外,近期我国临床还从未接触养殖动物的患者中分离到了3株ST9型MRSA[36],提示动物来源的MRSA极有可能已经向社区人群扩散并导致疾病发生,应引起足够重视。
        spa分型结果显示,t899型菌株(ST9)为优势克隆,耐药谱结果显示其耐受7种以上抗生素,耐药现象严重。以往报道显示,我国(陕西、上海、四川、河北和湖北)动物源MRSA主要以ST9-t899克隆系为主[37,38,39],张强等[39]研究显示该克隆系菌株不仅对所有β-内酰胺类抗生素都耐药,对大环内酯类、喹诺酮类、林可胺类及四环素类等非β-内酰胺类抗生素也表现出不同程度的耐药,这与本研究结果一致,提示ST9-t899克隆系的菌株具有多重耐药特性,给动物性食品和人类健康构成潜在的风险。本研究发现的t437型MRSA近年来在亚洲、欧洲等地区的食品中也多有报道[36,39,40],有研究认为,欧洲社区人群和食品中CC59-t437型MRSA克隆可能是经食品贸易和旅行从亚洲传播过去的[35],说明MRSA克隆株可在不同地域间发生传播和流行。
        本研究结果还显示,MLVA分型获得的DI值虽然低于PFGE,但要高于spa分型和MLST,这与Schouls等[23]的研究结果一致。PFGE分型虽然能够获得很好的分型结果,但其操作步骤复杂、要求高,不利于各实验室标准化和比较分析,因而不适于长期大规模的调查监测。而MLVA操作简便、省时省力,对操作人员的技术水平要求不高,较spa分型和MLST又具有较高的分型能力,分型结果与PFGE基本一致,且不需要进行测序,在处理食源性MRSA所致突发事件时,可替代上述3种方法进行溯源分析,对快速确定病因食品和暴发菌株具有重要意义。同时,由结果可见,相同MLVA谱型的菌株又能被其他3种分型方法识别为不同的基因型,因此在进行长期分子流行病学研究时,同时应用2种以上的分型方法可以获得更好的分辨率,可更好地掌握MRSA菌株的流行特征和基因多样性。此外,虽然本研究从2012年全国食品污染物监测网金黄色葡萄球菌菌株中筛选到21株MRSA菌株进行四种分子分型方法评价,关于这几种方法在其他食源性MRSA菌株分子分型分析应用中可能还存在菌株间的差异,因此本研究尚存在一定的局限性,仍需要通过大量MRSA菌株进行验证。值得注意的是,通过抗生素药敏试验发现,不同流行克隆的MRSA具有特征性耐药谱,这对研究不同MRSA流行克隆的耐药机制,进而指导动物养殖和食品生产中抗生素的合理应用,从根本上控制MRSA对食品的污染和对人群的健康危害具有重要意义。

参考文献
[1]de Carvalho FerreiraD, CisneFAC, CavalcanteFS, et al. Necrotizing fasciitis secondary to community pneumonia by Panton-Valentine leukocidin-positive methicillin-resistant Staphylococcus aureus [J]. Am J Respir Crit Care Med, 2012, 186(2): 202-203. DOI: 10.1164/ajrccm.186.2.202.
[2]ChangchienCH, ChenYY, ChenSW, et al. Retrospective study of necrotizing fasciitis and characterization of its associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Taiwan [J]. BMC Infect Dis, 2011, 11: 297. DOI: 10.1186/1471-2334-11-297.
[3]GonzalezBE, TeruyaJ, MahoneyDH, et al. Venous thrombosis associated with staphylococcal osteomyelitis in children [J]. Pediatrics, 2006, 117(5): 1673-1679. DOI: 10.1542/peds.2005-2009.
[4]SeltzLB, SmithJ, DurairajVD, et al. Microbiology and antibiotic management of orbital cellulitis [J]. Pediatrics, 2011, 127(3): e566-572. DOI: 10.1542/peds.2010-2117.
[5]K?ckR, BeckerK, CooksonB, et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA): burden of disease and control challenges in Europe [J]. Euro Surveill, 2010, 15(41): 19688.
[6]DavidMZ, DaumRS. Community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus: epidemiology and clinical consequences of an emerging epidemic [J]. Clin Microbiol Rev, 2010, 23(3): 616-687. DOI: 10.1128/CMR.00081-09.
[7]SongJH, HsuehPR, ChungDR, et al. Spread of methicillin-resistant Staphylococcus aureus between the community and the hospitals in Asian countries: an ANSORP study [J]. J Antimicrob Chemother, 2011, 66(5): 1061-1069. DOI: 10.1093/jac/dkr024.
[8]Four pediatric deaths from community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus — Minnesota and North Dakota, 1997-1999 [J]. MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 1999, 48(32): 707-710.
[9]NicholKA, AdamHJ, HussainZ, et al. Comparison of community-associated and health care-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Canada: results of the CANWARD 2007-2009 study [J]. Diagn Microbiol Infect Dis, 2011, 69(3): 320-325. DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2010.10.028.
[10]HennekinneJA, De BuyserML, DragacciS. Staphylococcus aureus and its food poisoning toxins: characterization and outbreak investigation [J]. FEMS Microbiol Rev, 2012, 36(4): 815-836. DOI: 10.1111/j.1574-6976.2011.00311.x.
[11]CragoB, FerratoC, DrewsSJ, et al. Prevalence of Staphylococcus aureus and methicillin-resistant S. aureus (MRSA) in food samples associated with foodborne illness in Alberta, Canada from 2007 to 2010 [J]. Food Microbiol, 2012, 32 (1): 202-205. DOI: 10.1016/j.fm.2012.04.012.
[12]王伟,郭云昌,裴晓燕,等.中国食源性和猪源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌遗传特性和耐药特征分析[J].卫生研究, 2013, 42(6): 925-931.
[13]王迪,张晓嫒,陈倩,等.北京市食源性耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌的分子特征研究[J].中国卫生检验杂志, 2014, 24(22): 3286-3288.
[14]WangJL, WangJT, ShengWH, et al. Nosocomial methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) bacteremia in Taiwan: mortality analyses and the impact of vancomycin, MIC= 2 mg/L, by the broth microdilution method [J]. BMC Infect Dis, 2010, 10: 159. DOI: 10.1186/1471-2334-10-159.
[15]SallamKI, Abd-ElghanySM, ElhadidyM, et al. Molecular Characterization and Antimicrobial Resistance Profile of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus in Retail Chicken [J]. J Food Prot, 2015, 78(10): 1879-1884. DOI: 10.4315/0362-028X.JFP-15-150.
[16]JacksonCR, DavisJA, BarrettJB. Prevalence and characterization of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates from retail meat and humans in Georgia [J]. J Clin Microbiol, 2013, 51(4): 1199-1207. DOI: 10.1128/JCM.03166-12.
[17]LiG, WuC, WangX, et al. Prevalence and characterization of methicillin susceptible Staphylococcus aureus ST398 isolates from retail foods [J]. Int J Food Microbiol, 2015, 196: 94-97. DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2014.12.002.
[18]王迪,张晓嫒,陈倩,等.北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究[J].中国食品卫生杂志, 2014, 26(5): 428-434. DOI: 10.13590/j.cjfh.2014.05.005.
[19]王茂起,刘秀梅,王竹天.中国食品污染监测体系的研究[J].中国食品卫生杂志, 2006(06):491-497. DOI:10.3969/j.issn.1004-8456.2006.06.001.
[20]JorgensenJH. Methods for antimicrobial dilution and disk susceptibility testing of infrequently isolated or fastidious bacteria; approved guideline [S]. Wayne Pennsylvania: Clinical Laboratory Standards Institute, 2015.
[21]EnrightMC, DayNP, DaviesCE, et al. Multilocus sequence typing for characterization of methicillin-resistant and methicillin-susceptible clones of Staphylococcus aureus [J]. J Clin Microbiol, 2000, 38(3): 1008-1015.
[22]HarmsenD, ClausH, WitteW, et al. Typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a university hospital setting by using novel software for spa repeat determination and database management [J]. J Clin Microbiol, 2003, 41(12): 5442-5448.
[23]SchoulsLM, SpalburgEC, van LuitM, et al. Multiple-locus variable number tandem repeat analysis of Staphylococcus aureus: comparison with pulsed-field gel electrophoresis and spa-typing [J]. PLoS One, 2009, 4(4): e5082. DOI: 10.1371/journal.pone.0005082.
[24]BannermanTL, HancockGA, TenoverFC, et al. Pulsed-field gel electrophoresis as a replacement for bacteriophage typing of Staphylococcus aureus [J]. J Clin Microbiol, 1995, 33(3): 551-555.
[25]AlibayovB, ZdeňkováK, PurkrtováS, et al. Detection of some phenotypic and genotypic characteristics of Staphylococcus aureus isolated from food items in the Czech Republic [J]. Ann Microbiol, 2014, 64(4): 1587-1596.
[26]AlibayovB, Baba-MoussaL, SinaH, et al. Staphylococcus aureus mobile genetic elements [J]. Mol Biol Rep, 2014, 41(8): 5005-5018. DOI: 10.1007/s11033-014-3367-3.
[27]LeungYH, LaiRW, ChanAC, et al. Risk factors for community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection in Hong Kong [J]. J Infect, 2012, 64(5): 494-499. DOI: 10.1016/j.jinf.2012.02.009.
[28]FritzSA, EpplinEK, GarbuttJ, et al. Skin infection in children colonized with community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus [J]. J Infection, 2009, 59(6): 394-401.DOI: 10.1016/j.jinf.2012.02.009.
[29]赵嘉咏,张玉凯,谢志强,等. 2011—2013年河南省肠炎沙门菌耐药与分子分型研究[J].中华预防医学杂志, 2016, 50(3): 261-265. DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2016.03.014.
[30]赵晓菲,袁敏,陈霞,等.携带新型金属β-内酰胺酶基因菌株在某患者体内播散及耐药研究[J].中华预防医学杂志, 2017, 51(10): 890-895.DOI:10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2017.10.005.
[31]SimorAE, GilbertNL, GravelD, et al. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus colonization or infection in Canada: National Surveillance and Changing Epidemiology, 1995-2007 [J]. Infect Control Hosp Epidemiol, 2010, 31(4): 348-356. DOI: 10.1086/651313.
[32]TenoverFC, McDougalLK, GoeringRV, et al. Characterization of a strain of community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus widely disseminated in the United States[J]. J Clin Microbiol, 2006,44(1):108-118. DOI: 10.1128/JCM.44.1.108-118.2006.
[33]ZhangH, XiaoM, KongF, et al. A multicentre study of meticillin-resistant Staphylococcus aureus in acute bacterial skin and skin-structure infections in China: susceptibility to ceftaroline and molecular epidemiology [J]. Int J Antimicrob Agents, 2015, 45(4): 347-350. DOI: 10.1016/j.ijantimicag.2014.12.014.
[34]庞璐,徐进,林兰,等.动物源性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的研究进展[J].中国药事, 2012, 26(11): 1249-1254. DOI: 10.3969/j.issn.1002-7777.2012.11.027.
[35]WangX, LiG, XiaX, et al. Antimicrobial susceptibility and molecular typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in retail foods in Shaanxi, China [J]. Foodborne Pathog Dis, 2014, 11(4): 281-286. DOI: 10.1089/fpd.2013.1643.
[36]YuF, LuC, LiuY, et al. Emergence of quinupristin/dalfopristin resistance among livestock-associated Staphylococcus aureus ST9 clinical isolates [J]. Int J Antimicrob Agents, 2014, 44(5): 416-419. DOI: 10.1016/j.ijantimicag.2014.06.020.
[37]王学敏,姚建楠,李蓓蓓,等.上海市猪源与人源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离机分子分型[J].中国兽医科学, 2013, 43(3): 252-255.
[38]CuiS, LiJ, HuC, et al. Isolation and characterization of methicillin-resistant Staphylococcus aureus from swine and workers in China [J]. J Antimicrob Chemother, 2009, 64(4): 680-683. DOI: 10.1093/jac/dkp275.
[39]张强,邢晓楠,王新,等. ST9型动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子分型、毒素基因检测及耐药性分析[J].畜牧兽医学报, 2014, 45(5): 853-858. DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.05.026.
[40]GlasnerC, PluisterG, WesthH, et al. Staphylococcus aureus spa type t437: identification of the most dominant community-associated clone from Asia across Europe [J]. Clin Microbiol Infect, 2015, 21(2): 163.e1-8. DOI: 10.1016/j.cmi.2014.09.010.