中华预防医学杂志    2018年05期 脑海绵状血管瘤因子3基因缺陷促进低铅暴露诱导的阿尔茨海默病样病变的早期改变    PDF     文章点击量:203    
中华预防医学杂志2018年05期
中华医学会主办。
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吴赛 夏冬 柳怀湘 赵和平 王晓会 高艳芳 赵志强 肖琛 邢秀梅 何云
WuSai,XiaDong,LiuHuaixiang,ZhaoHeping,WangXiaohui,GaoYanfang,ZhaoZhiqiang,XiaoChen,XingXiumei,HeYun
脑海绵状血管瘤因子3基因缺陷促进低铅暴露诱导的阿尔茨海默病样病变的早期改变
Cerebral cavernous malformation 3 gene deficiency promotes early changes in Alzheimer disease-like lesions induced by low lead exposure
中华预防医学杂志, 2018,52(5)
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2018.05.015

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投稿日期: 2017-12-29
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脑海绵状血管瘤因子3基因缺陷促进低铅暴露诱导的阿尔茨海默病样病变的早期改变
吴赛 夏冬 柳怀湘 赵和平 王晓会 高艳芳 赵志强 肖琛 邢秀梅 何云     
吴赛 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
夏冬 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
柳怀湘 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
赵和平 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
王晓会 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
高艳芳 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
赵志强 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
肖琛 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
邢秀梅 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
何云 510080 广州, 中山大学公共卫生学院预防医学系
摘要: 目的  观察脑海绵状血管瘤因子3(CCM3)基因敲除小鼠血脑屏障功能改变的影响,初步探讨铅暴露环境下,CCM3基因敲除与阿尔茨海默病(AD)之间的关系。方法  以10周龄野生型小鼠与CCM3+/-杂合型小鼠为实验对象。采用单纯随机法,将小鼠分别分为野生型对照组、野生型铅暴露组、杂合型对照组、杂合型小鼠铅暴露组,每组8只小鼠。铅暴露组给予质量分数0.05%醋酸铅饮水染毒12周,对照组无限制自由饮用去离子水。石墨炉原子吸收法检测各组小鼠血铅及脑铅水平;取各组小鼠脑组织制作石蜡切片,HE染色观察组织形态,免疫组化法检测脑组织中Aβ1-42的表达并标记脑部微血管;提取各组小鼠脑组织蛋白,使用Western blot法检测蛋白Claudin-5和紧密连接蛋白(ZO-1)的相对表达量,并检测脑部磷酸化Tau蛋白(p-Tau)的相对表达量;提取各组小鼠脑组织RNA,使用qRT-PCR法检测小鼠LRP-1基因mRNA的相对表达量。结果  铅暴露组野生型、杂合型小鼠血铅[(216.07±84.16)、(189.64±101.86)μg/L]分别高于对照组野生型和杂合型[(19.52±11.46)、(11.79±8.20)μg/L](t值分别为4.18、3.79,P值分别为0.006、0.016)。铅暴露组野生型和杂合型脑铅[(1.78±0.69)、(1.74±0.66)μg/L]分别高于对照组野生型和杂合型[(1.06±0.87)、(0.97±0.64)μg/L](t值分别为3.67、3.88,P值分别为0.018、0.015)。通过HE染色观察,各组小鼠脑部未出现明显病变;免疫组化结果显示各组小鼠脑部无Aβ1-42沉积;铅暴露组杂合型小鼠脑部微血管数目减少。野生型、杂合型铅暴露组小鼠脑部Claudin-5(0.96±0.04、0.59±0.01)均低于对照组小鼠(1.30±0.03、1.07±0.08)(F=199.27,P<0.001)。野生型、杂合型铅暴露组小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达水平(0.32±0.10、0.06±0.01)均低于对照组(1.00±0.06、2.12±0.18)(F=288.29,P<0.001);铅暴露组杂合型小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达水平低于野生型小鼠[(0.06±0.01)比(0.32±0.10),t=26.90,P<0.001]。结论  成年期小鼠在低剂量铅暴露环境下并未出现显著的AD样病变,但导致小鼠脑部血脑屏障的早期损伤和AD样病变的早期改变。其中CCM3+/-小鼠对铅暴露的敏感性强于野生型小鼠,提示CCM3基因的缺失可能加速小鼠在铅暴露下发生AD的潜在危险。
关键词 :铅;阿尔茨海默病;CCM3基因;血脑屏障
Cerebral cavernous malformation 3 gene deficiency promotes early changes in Alzheimer disease-like lesions induced by low lead exposure
WuSai,XiaDong,LiuHuaixiang,ZhaoHeping,WangXiaohui,GaoYanfang,ZhaoZhiqiang,XiaoChen,XingXiumei,HeYun     
Sun Yat-sen University School of Public Health, Guangzhou 510080, China
Corresponding author: He Yun, Email: heyun7@mail.sysu.edu.cn
Abstract:Objective  To investigate the effects of cerebral cavernous malformation 3 (CCM3) gene knockout on the lead exposure-induced blood-brain barrier malfunction in mice brain, and the relationship between CCM3 knockout and the Alzheimer's disease (AD).Methods  Wide type (WT) mice and CCM3+/- mice were divided into 4 groups, control group and lead exposed group in WT as well as CCM3+/- mice. Lead exposed groups were treated with 0.05% lead acetate in drinking water for 12 weeks, while control group drink deionized water freely. Blood lead and brain lead levels in each group were detected by graphite furnace atomic absorption spectrometry. The brain tissue of each group was made into paraffin sections, whose morphology were observed by HE staining. The expression of Aβ1-42 in brain tissue was detected by immunohistochemistry and the brain capillaries were labeled by VRGFR2. The protein expression of Claudin-5, ZO-1, and p-Tau was detected by Western blot. The brain tissue RNA was extracted and the relative expression of LRP-1 mRNA was detected by qRT-PCR.Results  The levels of blood lead WT (216.07±84.16) and CCM3+/- (189.64±101.86) μg/L in lead exposed group were higher than those in control group WT (19.52±11.46) and CCM3+/- (11.79±8.20) μg/L, the difference was statistically significant (t=4.18, P=0.006; t=3.79, P=0.016). The levels of brain lead WT (1.78±0.69) and CCM3+/- (1.74±0.66) μg/L were higher than those in control group WT (1.06±0.87) and CCM3+/- (0.97±0.64) μg/L, the difference was statistically significant (t=3.67, P=0.018; t=3.88, P=0.015). The HE staining showed no obvious lesions in the brain of each group of mice. The results of immunohistochemistry showed that there was no Aβ1-42 deposition in the brain of mice in each group. The numbers of microvessels in the brain of CCM3+/- mice in the lead exposed group were decreased. Compared with the relative expression levels of Claudin-5 (WT: 1.30±0.03, CCM3+/-: 1.07±0.08) in control group mice brain, the relative expression of Claudin-5 (WT: 0.96±0.04, CCM3+/-: 0.59±0.01) was decreased with statistical significance (F=199.27, P<0.001). The relative expression level of LRP-1 gene mRNA in brain of lead exposed group (WT: 0.32±0.10, CCM3+/-: 0.06±0.01) was higher than that of unexposed group (WT:1.00±0.06, CCM3+/-:2.12±0.18), the difference was statistically significant (F=288.29, P<0.001). The relative expression level of LRP-1 gene mRNA in brain of CCM3+/- mice exposed to lead was lower than that of WT mice ((0.06±0.01)vs(0.32±0.10), t=26.90, P<0.001).Conclusion  The mice did not show significant AD-like lesions under low-does lead exposure, but resulted in early damage of brain blood-brain barrier and early changes of AD-like lesions in mice, with CCM3+/- mice being sensitive to lead exposure stronger than that of WT mice, suggesting that deletion of CCM3 gene may be one of the potential risk factors for accelerating the development of AD in mice exposed to lead.
Key words :Lead;Alzheimer's disease;CCM3 gene;Blood-brain barrier
全文

铅被广泛地运用在工业生产中,是一种有全身毒性的金属。铅暴露能够导致血管病变,其主要的机制可能是铅破坏了血管内皮细胞的结构和功能[1]。同时铅暴露也能够导致多种神经退行性疾病的发生,尤其是阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的发生和发展[2,3]。近年来,关于脑血管疾病与AD相关性的研究也揭示这两种疾病存在密不可分的关系[4,5]。其中,内皮细胞作为血管的重要组成部分参与了血脑屏障的构成,与两者的发病有着紧密的联系[5,6]。脑海绵状血管瘤因子3(cerebral cavernous malformation3,CCM3)参与多种信号转导的多功能基因,参与了血管生成的相关事件。体外实验显示,CCM3基因缺失能够导致脑血管内皮细胞的功能障碍,使得血脑屏障中紧密连接结构发生改变[6]。该基因突变能够导致血管发育不良,且能导致脑血管瘤的生成[7,8]。本课题组前期研究发现,铅暴露能够导致CCM3基因缺陷小鼠血管新生异常[9],说明CCM3基因缺失加重了铅暴露对小鼠脑血管的损伤作用。结合脑血管损伤与AD之间的关系以及CCM3基因脑血管损伤作用。并进一步探索低剂量铅暴露环境下,CCM3基因缺失与AD之间是否存在一定关系。

材料与方法  

1.实验动物:  本研究方案经中山大学公共卫生学院动物伦理委员会审查批准(批号:00187)。将10周龄CCM3+/-杂合型小鼠(来自耶鲁大学王敏教授实验室)作为杂合组,饲养于SPF级动物房中。采用单纯随机法将野生型、杂合型小鼠分为4组,分别为野生型对照组、野生型铅暴露组、杂合型对照组、杂合型小鼠铅暴露组,每组8只小鼠,雌雄各半。铅暴露组经口饮水染毒,在设定染毒剂量时,以珠江流域水中重金属含量(77 mg/kg)[10]作为参考,设定小鼠的每日铅摄入浓度约为80 mg/kg。考虑到本次实验小鼠平均体重约27 g,小鼠每日饮水量约为7 ml,因此采用质量分数0.05%醋酸铅染毒液(0.032 mg/ml)作为染毒剂量。称取500 mg醋酸铅溶于800 ml去离子水中,调节pH为7.2,用去离子水定容至1 L,配置成0.05%醋酸铅。染毒时间为12周。染毒期间自由进食,各组小鼠分笼饲养。12周饮水染毒结束后,心脏取血,EDTA抗凝保存,解剖小鼠,取出小鼠脑组织,部分冻存备用,部分固定后制作石蜡切片。对照组无限制自由饮用去离子水。

2.小鼠血铅水平及脑铅水平检测:  取150 μl的EDTA抗凝全血加入600 μl的体积分数为5%硝酸,震荡混均,静置15 min,42 702×g离心5 min,取600 μl上清液。使用石墨炉原子吸收光谱法检测血铅浓度。取适量小鼠脑组织,称重后加入1 ml体积分数为5%硝酸,后续步骤同血铅测定。

3.小鼠脑组织HE染色:  石蜡切片使用二甲苯及酒精梯度脱蜡至水,切片放入苏木精中染色10~30 min,用自来水流水冲洗至切片变蓝。切片放入1%盐酸乙醇液中褪色2~10 s,切片变红,颜色较浅即可。自来水漂洗使其变蓝。使用乙醇梯度脱水,0.5%伊红乙醇液对比染色1~3 min。切片放至体积分数为95%乙醇中洗去多余红色,然后放入无水乙醇中3~5 min,滤纸吸干多余乙醇,二甲苯透明后,使用中性树脂封片。于显微镜下观察。

4.免疫组化检测小鼠脑组织微血管的数目和Aβ1-42的表达:  采用链霉亲和素-生物素-酶复合物(strept avidin-biotin complex,SABC)染色法,SABC试剂盒由武汉博士得生物工程有限公司提供。石蜡切片酒精梯度脱蜡至水,体积分数3%的H2O2室温处理10 min,磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)浸洗3次,每次5 min。以pH 6.0的枸橼酸钠-枸橼酸缓冲液于微波炉中对石蜡切片进行抗原修复。质量分数5%牛血清白蛋白(albumin from bovine serum,BSA)于37 ℃封闭30 min。甩干封闭液,分别滴加血管内皮细胞生长因子受体2 (vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)一抗工作液4 ℃(购自美国Cell Signaling Technology公司,配置比1∶1 600),β-淀粉样蛋白1-42(amyloid β-protein1-42,Aβ1-42)一抗工作液(Abcam 1∶200)孵育18 h,PBS浸洗3次,每次5min。滴加二抗工作液,37 ℃孵育30 min,PBS浸洗3次,每次5 min。滴加SABC,37 ℃孵育30 min,PBS浸洗3次,每次5 min。3,3-二氨基联苯胺(diaminobezidin,DAB)镜下显色,酒精梯度脱水后,二甲苯透明,最后使用中性树脂封片。

5.Western blot法检测连接蛋白Claudin-5、紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)和磷酸化Tau蛋白(phosphate-tau,p-Tau)的相对表达水平:  取适量冻存脑组织,以RIPA裂解液于冰上抽提脑组织总蛋白,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(bicinchoninic acid,BCA)试剂盒(碧云天生物技术公司)定量后于-80 ℃保存待用。配制体积分数为12%的分离胶和5%的浓缩胶,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离蛋白质,将蛋白电转至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上。根据蛋白相对分子质量标准和相对分子质量于膜上分别剪下目的蛋白和β-actin蛋白条带,用质量分数为5%脱脂奶粉室温封闭1 h,用吐温-20磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution tween-20,PBST)清洗3次,每次5 min。将PVDF膜浸泡于目的蛋白Claudin-5(购于Abcam公司1∶1 000),ZO-1(购于ProtienTech公司1∶1 000),p-Tau(购于Abcam公司1∶2 000)和β-actin(购于Sigma公司1∶4 000)一抗工作液中,于4 ℃孵育过夜。用PBST漂洗3次后,加入二抗工作液(全式金1:5 000)室温孵育1 h,PBST洗膜3次,每次5 min,加入ECL液进行蛋白曝光。以Image J软件定量分析目的蛋白的灰度值作为其相对表达水平,各组样品以自身肌动蛋白(β-actin)表达水平作为参照。

6.定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测低密度脂蛋白受体蛋白1(low-density lipoprotein receptor-related protein 1,LRP-1)基因mRNA相对表达水平:  取适当冻存脑组织,以Trizol抽提脑组织总RNA,逆转录合成cDNA。通过Primer Bank获取相关基因序列,由上海捷瑞公司合成引物。Lrp-1基因引物序列按5'-3'顺序,上游为:ACTATGGATGCCCCTAAAACTTG;下游:GCAATCTCTTTCACCGTCACA。按照SYBR Premix Taq TM试剂盒说明书配制SYBR Green体系,进行qRT-PCR。采用比较CT值法,以β-actin作为内参,标准化各组样品基因的表达水平。其中对照组为未染毒C57BL/6J小鼠组(购自中山大学实验动物中心)。

7.统计学分析:  采用SPSS 20.0软件进行统计分析。小鼠血铅、脑铅水平以及脑部微血管数目,经正态性检验符合正态分布或近似正态分布,以±s描述,采用独立样本t检验比较野生型、杂合型之间的区别。蛋白相对表达量、mRNA相对表达量经正态性检验符合正态分布或近似正态分布,以±s描述,采用单因素方差法分析不同组间差异,检验值为F值,组间比较采用LSD检验方法。以P<0.05为差异有统计学意义。

结果  

1.小鼠血铅水平:  同基因型中,铅暴露组小鼠血铅水平高于对照组小鼠,表明铅染毒模型构建成功。野生型铅暴露组小鼠与对照组小鼠血铅水平分别为(216.07±84.16)、(19.52±11.46)μg/L(t=4.18,P=0.006)。杂合型铅暴露组小鼠与对照组小鼠血铅水平分别为(189.64±101.86)、(11.79±8.20)μg/L(t=3.79 P=0.016)。

2.小鼠脑铅水平:  野生型铅暴露组小鼠与对照小鼠组脑铅水平分别为(1.78±0.69)、(1.06±0.87)μg/L(t=3.67,P=0.018)。杂合型基因型铅暴露组小鼠与对照组小鼠脑铅水平分别为(1.74±0.66)、(0.97±0.64)μg/L(t=3.88,P=0.015)。

3.铅暴露未导致小鼠脑组织出现明显病变:  如图1所示,铅暴露组小鼠脑组织与对照组小鼠脑组织相比未出现显著的病理结构变化。在对照组和铅暴露组中,杂合型小鼠脑组织与野生型小鼠脑组织相比无显著的病理结构变化。

图1野生型、杂合型小鼠铅暴露组与对照组大脑皮质(HE染色,200×)

4.Aβ1-42免疫组化:  结果如图2所示,在各组小鼠的大脑皮质中均未观察到Aβ1-42的蛋白沉积。说明铅暴露未导致β淀粉样蛋白在小鼠大脑皮质中的沉积。

图2野生型、CCM3型小鼠铅暴露组与对照组小鼠大脑皮质Aβ1-42免疫组化改变(200×)

5.铅暴露导致杂合型小鼠脑组织中微血管数目减少:  免疫组织化学结果如图3所示。在野生型小鼠中,铅暴露组大脑皮质中VEGFR-2所标记微血管数目[(67±5)个]与对照组相比[(69±6)个]差异没有统计学意义;在杂合型小鼠中,铅暴露组大脑皮质中VEGFR-2所标记微血管数目[(17±5)个]低于对照组[(66±4)个],差异有统计学意义(t=16.80,P<0.001)。而铅暴露组中,杂合型小鼠与野生型小鼠相比,大脑皮质中VEGFR-2所标记微血管数目减少,且差异有统计学意义(t=17.15,P<0.001)。

图3铅暴露下野生、杂合型两种基因型小鼠脑部微血管的数目(200×)

6.Claudin-5、ZO-1、p-Tau蛋白的相对表达量:  Western blot试验结果如表1所示,经12周醋酸铅饮水染毒,在野生型小鼠和杂合型小鼠中,铅暴露组小鼠脑部Claudin-5和ZO-1蛋白相对表达水平低于对照组(P<0.05)。在铅暴露组中,杂合型小鼠与野生型小鼠相比,脑组织中Claudin-5和ZO-1蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。在野生型小鼠和杂合型小鼠中,铅暴露组小鼠脑部p-Tau蛋白的相对表达量高于对照组(P<0.05)。在铅暴露组中,杂合型小鼠相比野生型小鼠,脑组织中p-Tau蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。

表1两组小鼠脑部Claudin-5、ZO-1和p-Tau蛋白相对表达量(±sn=4)

7.小鼠脑组织中LRP-1基因mRNA的相对表达水平:  qRT-PCR试验结果如表2所示,经统计学分析,铅暴露组小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达水平低于对照组。对照组杂合型小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达水平高于野生型小鼠(P<0.05);铅暴露组杂合型小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达水平低于野生型小鼠(P<0.001)。说明在铅暴露环境下,杂合型小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达水平较野生型小鼠下降趋势更加明显。

表2两组小鼠脑部低密度脂蛋白受体蛋白1基因mRNA相对表达量(±sn=4)

讨论  目前已有许多动物研究已经证实了铅暴露与AD之间存在因果关系[11]。人群流行病学研究结果也显示,铅暴露与AD之间存在联系[12]。机体长期暴露于铅环境下,铅可以经多种途径吸收进入血液系统,而后再分配至不同的器官。铅所接触的血管内皮即成为了机体的重要屏障。内皮细胞是小鼠血脑屏障的重要组成部分,小鼠血脑屏障的破坏会导致外源化合物和病原微生物更容易进入脑内,对脑部功能和结构造成不同程度的影响[13,14]。有许多学者提出了AD发病与脑血管功能障碍及结构损伤之间存在着密切的联系[5,15,16,17]。血管内皮细胞的功能障碍是诱发AD的可能机制之一[4,6]。由于CCM3基因的缺失能够诱导,并加重铅、砷等物质对血管内皮的损伤,从而导致血脑屏障的破坏,因此本研究探讨了CCM3基因进行研究。
        本研究结果显示,铅暴露组的小鼠的血铅和脑铅水平均高于对照组,说明本次醋酸铅饮水染毒造模成功;野生型和CCM3+/-小鼠血液和脑部的铅含量却没有明显的差异,提示CCM3基因对血铅和脑铅水平影响差异没有统计学意义。HE切片并未显示出铅暴露组有明显的组织病理变化。Aβ淀粉样蛋白作为AD的疾病进程中经典的标志物,被广泛运用于AD的诊断中。Aβ1-42为Aβ淀粉样蛋白的亚单位,是导致AD的主要因素之一[18]。Aβ淀粉样蛋白免疫组化结果显示,各组小鼠脑部均未观察到Aβ1-42淀粉样蛋白的沉积。提示低剂量的铅暴露并未导致野生型小鼠及杂合型小鼠出现典型的AD疾病表征。其可能的原因是铅暴露的剂量低,时间短;铅暴露的时期在小鼠成年以后,其毒性效应并不明显[19]。VEGFR-2作为血管生长内皮因子的受体之一,能够调节VEGF介导的内皮细胞增殖、迁移、小管形成以及血管的生发[20]。本研究中,通过VEGFR-2来标记小鼠脑部的血管内皮细胞,以及用免疫组化实验来观察在铅暴露环境下,野生型小鼠和杂合型小鼠脑部微血管的改变。实验结果显示,野生型小鼠中,铅暴露组小鼠对比对照组小鼠脑部的微血管数目并无明显差异;而在杂合型小鼠中,铅暴露组小鼠脑部微血管数目较对照组显著减少。提示铅暴露能够减少杂合型小鼠脑部微血管的生成,而这一现象在野生型小鼠中并不明显。Western blot实验结果显示,AD疾病进展过程中的前期标志物p-Tau[21]的表达量在铅暴露环境下显著增加,而血脑屏障的紧密连接蛋白Cluadin-5和ZO-1[22,23]的表达量在铅暴露环境下均出现显著下降,且杂合型小鼠对比野生型小鼠,其下降趋势更为明显,说明CCM3基因的缺失能够加重铅暴露导致的血脑屏障的损伤。有实验证实,铅暴露能够导致小鼠脑组织中有清除β样淀粉蛋白的LRP-1蛋白的表达量下降[24,25];本研究通过qRT-PCR检测LRP-1基因mRNA的相对表达量发现,铅暴露能够导致小鼠脑部LRP-1基因mRNA相对表达量下降,且在杂合型小鼠中下降趋势更为明显,说明CCM3的缺失能够加重铅暴露诱导的小鼠脑部LRP-1基因的表达量的下降。LRP-1基因主要在血管平滑肌细胞和神经细胞中表达[26,27],在本实验中,小鼠脑部微血管数目减少可能是造成LRP-1基因mRNA表达水平下降的主要原因之一。铅暴露对神经细胞的直接毒性作用也可能导致LRP-1基因mRNA表达水平的下降,但本实验结果并不能证实,需进一步研究探索。
        综上所述,本实验中铅暴露并未引起野生型及杂合型小鼠出现较为明显的AD样病变,如β淀粉样蛋白在脑部的沉积。但铅暴露能够导致杂合型小鼠脑内微血管数目的减少,使得脑内AD早期病变的标志物之一p-Tau蛋白表达增加,说明铅暴露能够导致小鼠出现AD样病变的早期改变,在杂合型小鼠尤为明显。其可能的机制是铅暴露导致血脑屏障中紧密连接蛋白的表达量下降,使得血脑屏障的功能障碍,同时降低了脑组织清除β淀粉样蛋白的能力。这些指标的改变在杂合型小鼠中表现的尤为明显,提示CCM3基因的敲除可能是加速铅暴露致小鼠AD的危险因素。小鼠的生命周期中,不同时期的铅暴露所导致的毒性作用并不相同,小鼠成年后铅暴露与胚胎期铅暴露相比,前者的AD样改变并不明显,而后者能够诱导小鼠出现明显的认知功能障碍和AD的疾病表征[28]。因此下一阶段的实验将以早期铅暴露,长期低剂量染毒来观察铅暴露对小鼠的神经毒性。探讨铅暴露诱导的脑血管损伤与AD发病之间的关系。

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