中华医学会主办。
文章信息
- 杜正贵 王刘艳 周毅 万航宇 梁法清 吕青
- DuZhenggui,WangLiuyan,ZhouYi,WanHangyu,LiangFaqing,LyuQing
- CYP19A1基因rs7176005单核苷酸多态性与乳腺癌发病风险及临床病理特征的关系
- Association of CYP19A1 gene rs7176005 single nucleotide polymorphism with breast cancer risk and clinicopathologic features of tumor
- 中华预防医学杂志, 2018,52(8)
- http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2018.08.010
-
文章历史
- 投稿日期: 2017-10-10
王刘艳 成都市郫县中医医院外一科
周毅 四川省人民医院乳腺外科
万航宇 610041 成都,四川大学华西医院乳腺外科
梁法清 610041 成都,四川大学华西医院乳腺外科
吕青 610041 成都,四川大学华西医院乳腺外科
Corresponding author: Lyu Qing, Email: lqlq1963@163.com
乳腺癌在我国女性恶性肿瘤中发病人数占首位,死亡人数居第六位[
CYP19A1基因位于染色体15q21.1上,其编码的细胞色素P450芳香化酶是雌激素合成的一个功能酶,因而在乳腺癌的发病和进展中的作用不容忽视[
对象与方法
1.对象: 研究对象来自四川大学华西医院2012年9月至2016年11月乳腺科患者或者体检人员,并将其分为乳腺癌病例组、乳腺良性疾病组和对照组。(1)乳腺癌病例组:138例,全部患者均经组织病理证实并拥有完整的免疫组织化学诊断结果,结果包括,雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)及单克隆抗体Ki-67鉴定抗原(antigen identified by monoclonal antibody Ki-67,Ki-67)。同时,按照美国癌症联合委员会(American Joint Committee in Cancer,AJCC)第7版分期手册[
2.乳腺癌分子分型判定标准: 按照2013年St Galllen共识进行分子分型[
3.CYP19A1基因rs7176005多态位点基因型检测: 使用DNA采样试剂盒和核酸采样试剂盒(中国上海浦美生物医药科技有限公司)采集研究对象的口腔黏膜上皮细胞,然后用口腔拭子基因组DNA提取试剂盒(中国康为世纪公司)抽提患者基因组DNA,置于-20 ℃冰箱中备用。再采用ABI Prism7500型荧光定量PCR仪(美国应用生物系统公司)扩增CYP19A1基因启动子区序列,上游引物为:AAGAGTGTCTGATCCCACAGGTTGA;下游引物为:CAACACATAGCACAGTTCCTGATTT。反应体系为:25 μl,含50~100 ng基因组DNA,5×缓冲液5 μl,1.25 U HotStarTaq聚合酶,2 μl dNTPs,上下游引物各0.25 μl,加双蒸水至25 μl。PCR反应条件为:94 ℃预变性10 min,95 ℃变性30 s,55~65 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,共30~40循环后,72 ℃最终延伸5 min。最后,PCR产物应用Big Dye Terminator试剂盒在ABI 3730测序仪(美国应用生物系统公司)进行DNA直接测序,检测启动子区rs7176005位点碱基的多态性。
4.统计学分析: 采用SPSS 18.0软件进行数据整理和统计学分析。研究对象的年龄符合正态分布,采用
结果
1.基本情况: 乳腺癌病例组、乳腺癌良性疾病组、对照组对象分别为138、293和259例,年龄分别为(44.69±8.09)、(42.33±11.44)和(41.92±9.61)岁。
2.CYP19A1基因rs7176005单核苷酸多态性分布: CYP19A1基因rs7176005单核苷酸多态性C/T各基因型通过DNA直接测序鉴定,结果显示,在该位点基因型共分3种:野生型(CC)、杂合型(CT)以及纯和突变型(TT)。3组研究对象在CYP19A1基因rs7176005位点均以野生型(CC)和杂合型(CT)基因型为主,纯和突变(TT)基因型在各组中均仅占10%左右,但3组基因型的频率分布的差异无统计学意义(
3.研究对象CYP19A1基因rs7176005单核苷酸多态性情况: 对照组、乳腺良性疾病组以及乳腺癌组病例CYP19A1基因rs7176005单核苷酸多态性基因型分布两两比较均无统计学差异,以CC基因型为参照,CT或TT基因型没有显著性地提高乳腺良性疾病或者乳腺癌的发病危险,在显性模型分析中,也没有发现(CT+TT)基因型有增加乳腺良性疾病或者乳腺癌的发病风险。见
4.乳腺癌病例CYP19A1基因rs7176005多态性与病理特征的关系: 在138例乳腺癌病例中,CYP19A1基因rs7176005位点不同基因型的患者肿瘤组织大小差异有统计学意义(
讨论 目前关于CYP19A1基因单核苷酸多态性与乳腺癌发病风险的研究报道较少,也仅局限在欧美人群[
在本研究中,乳腺癌病例组、乳腺良性疾病组以及对照组均符合遗传平衡,具有恒定性,证实本研究入组病例具有群体代表性,进一步的分析发现,该位点的多态性基因型分布在各组研究人群之间差异并无统计学意义。提示该位点多态性可能为无义突变,rs7176005尚不足以作为低外显性的乳腺癌易感基因位点。
然而分析该多态位点与乳腺癌相关临床病理学特征的关系时,发现rs7176005位点基因型分布与肿瘤组织大小、肿瘤的TNM分期和Ki-67状态相关,其中含T等位基因的个体Ki-67阳性率较低,肿瘤较小,TNM分期也较低,尤其是TT基因型表现明显。推测其可能的机制是:野生型的等位基因(C)提高了芳香化酶的活性,使体内雌激素水平升高,然而增高了的雌激素水平尚不足以促进正常乳腺上皮细胞向癌细胞的转化,因此并未明显增加乳腺癌的患病风险,却明显地促进了激素受体阳性的癌细胞增殖生长,导致病例Ki-67阳性率较高,入院时包块大小也更大,从而TNM分期也较高。该理论是基于Haiman等[
此外,还有研究显示CYP19A1某些多态位点等位基因分布与雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)有关,并发现某些基因型与内分泌治疗效果有关,尤其是绝经后的妇女表现明显[
综上所述,CYP19A1基因rs7176005位点的多态性虽可能会对芳香化酶的合成功能以及内源性雌激素水平产生一定的影响,然而此影响对乳腺癌发病风险的影响非常有限,故不建议作为乳腺癌风险基因筛查的指标。但是含C等位基因的人群有肿瘤细胞快速增殖的可能,故建议缩短这类人群常规体检时间。本研究样本量尚不算大,rs7176005多态位点的作用尚需要多中心的大样本的临床遗传学研究进行确定,其机制探讨则有待于进一步基础研究分析该多态位点基因型对芳香化酶活性以及血雌二醇水平的影响。
[2]LecarpentierJ, NoguèsC, Mouret-FourmeE, et al. Breast Cancer Risk Associated with Estrogen Exposure and Truncating Mutation Location in BRCA1/2 Carriers[J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2015,24(4):698-707. DOI: 10.1158/1055-9965.EPI-14-0884.
[3]SantenRJ, YueW, WangJP. Estrogen metabolites and breast cancer[J]. Steroids, 2015,99(Pt A):61-66. DOI: 10.1016/j.steroids.2014.08.003.
[4]BlazerKR, SlavinT, WeitzelJN. Increased Reach of Genetic Cancer Risk Assessment as a Tool for Precision Management of Hereditary Breast Cancer[J]. JAMA Oncol, 2016,2(6):723-724. DOI: 10.1001/jamaoncol.2015.5975.
[5]DohertyJ, BonadiesDC, MatloffET. Testing for Hereditary Breast Cancer: Panel or Targeted Testing? Experience from a Clinical Cancer Genetics Practice[J]. J Genet Couns, 2015,24(4):683-687. DOI: 10.1007/s10897-014-9796-2.
[6]DesmondA, KurianAW, GabreeM, et al. Clinical Actionability of Multigene Panel Testing for Hereditary Breast and Ovarian Cancer Risk Assessment[J]. JAMA Oncol, 2015,1(7):943-951. DOI: 10.1001/jamaoncol.2015.2690.
[7]JacksonSA, DavisAA, LiJ, et al. Characteristics of individuals with breast cancer rearrangements in BRCA1 and BRCA2[J]. Cancer, 2014,120(10):1557-1564. DOI: 10.1002/cncr.28577.
[8]SunMY, DuHY, ZhuAN, et al. Genetic polymorphisms in estrogen-related genes and the risk of breast cancer among Han Chinese women[J]. Int J Mol Sci, 2015,16(2):4121-4135. DOI: 10.3390/ijms16024121.
[9]袁雪莲,徐珠屏,刘春容,等.持续肥胖、人类瘦素及瘦素受体基因多态性与不同分子亚型乳腺癌的关系研究[J].中华预防医学杂志,2017,51(6):533-538. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2017.06.015.
[10]Leyland-JonesB, GrayKP, AbramovitzM, et al. CYP19A1 polymorphisms and clinical outcomes in postmenopausal women with hormone receptor-positive breast cancer in the BIG 1-98 trial[J]. Breast Cancer Res Treat, 2015,151(2):373-384. DOI: 10.1007/s10549-015-3378-3.
[11]MazzucaF, BotticelliA, MazzottiE, et al. CYP19A1 GeneticPolymorphisms rs4646 and Osteoporosis in Patients Treated with Aromatase Inhibitor-Based Adjuvant Therapy[J]. Eurasian J Med, 2016,48(1):10-14. DOI: 10.5152/eurasianjmed.2015.008.
[12]EdgeSB, ByrdDR, ComptonCC,et al. AJCC cancer staging manual[M]. 7th ed. NewYork: Springer,2010.
[13]GoldhirschA, WinerEP, CoatesAS, et al. Personalizing the treatment of women with early breast cancer: highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2013[J]. Ann Oncol, 2013,24(9):2206-2223. DOI: 10.1093/annonc/mdt303.
[14]HaimanCA, DossusL, SetiawanVW, et al. Genetic variation at the CYP19A1 locus predicts circulating estrogen levels but not breast cancer risk in postmenopausal women[J]. Cancer Res, 2007,67(5):1893-1897. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-06-4123.
[15]RamalhinhoAC, Fonseca-MoutinhoJA, BreitenfeldGLA. Positive association of polymorphisms in estrogen biosynthesis gene, CYP19A1, and metabolism, GST, in breast cancer susceptibility[J]. DNA Cell Biol, 2012,31(6):1100-1106. DOI: 10.1089/dna.2011.1538.
[16]WatanabeJ, HaradaN, SuemasuK, et al. Arginine-cysteine polymorphism at codon 264 of the human CYP19 gene does not affect aromatase activity[J]. Pharmacogenetics, 1997,7(5):419-424.
[17]KhvostovaEP, PustylnyakVO, GulyaevaLF. Genetic polymorphism of estrogen metabolizing enzymes in Siberian women with breast cancer[J]. Genet Test Mol Biomarkers, 2012,16(3):167-173. DOI: 10.1089/gtmb.2011.0131.