中华预防医学杂志    2018年12期 山东省1例HIV长期不进展感染者的确证过程及随访情况    PDF     文章点击量:157    
中华预防医学杂志2018年12期
中华医学会主办。
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王国永 朱晓艳 张娜 孙晓光 林彬 郝连正 苏生利 陶小润 康殿民
WangGuoyong,ZhuXiaoyan,ZhangNa,SunXiaoguang,LinBin,HaoLianzheng,SuShengli,TaoXiaorun,KangDianmin
山东省1例HIV长期不进展感染者的确证过程及随访情况
Confirmatory process and follow-up of 1 case with long-term HIV infection in Shandong
中华预防医学杂志, 2018,52(12)
http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2018.12.013

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投稿日期: 2017-12-21
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山东省1例HIV长期不进展感染者的确证过程及随访情况
王国永 朱晓艳 张娜 孙晓光 林彬 郝连正 苏生利 陶小润 康殿民     
王国永 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
朱晓艳 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
张娜 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
孙晓光 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
林彬 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
郝连正 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
苏生利 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
陶小润 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
康殿民 250014 济南,山东省疾病预防控制中心艾滋病防制所
摘要: 目的  描述山东省1例HIV长期不进展感染者的确证过程及随访期内实验结果的变化。方法  研究对象为1例27岁男性HIV感染者,2013年8月7日首次ELISA检测HIV抗体阳性;密切接触者为研究对象确证感染前接触过的3个同性性伴,其中第一个性伴已无法取得联系。采用中国艾滋病综合防治信息系统首次流行病学调查问卷,由调查员对研究对象的一般人口学特征及行为学特征等内容进行面对面调查。在首次ELISA检测结果呈阳性后,对研究对象进行了4次随访(2013年8月14、21、30日和9月16日),每次随访均进行胶体硒法快速检测、ELISA、Western blot、CD4+T淋巴细胞和病毒载量检测;在确证感染后,对其进行长期随访检测CD4+T淋巴细胞和病毒载量,观察研究对象的病程进展。结果  研究对象与性伴一维持性行为时间为2011—2012年,其间连续多次HIV抗体ELISA检测结果均阴性;与性伴二维持性行时间为2013年1—4月,且在2013年4月发生最后1次无保护同性性行为,经溯源调查,性伴二为艾滋病综合防治信息系统抗病毒治疗模块中已进行抗病毒治疗的艾滋病患者;与性伴三维持性行为时间为2013年5—10月,性伴三的两次ELISA检测均阴性。2013年8月7日因需医院手术,研究对象进行了HIV抗体ELISA检测,结果呈阳性,而Western blot检测确证结果为HIV-1抗体不确定(带型为gp160/gp120/p24)。随后4次随访,HIV抗体快速检测均为阳性,ELISA检测均为阳性,Western blot确证结果均为HIV-1抗体阳性(带型均为gp160/gp120/gp41/p24/p17)。连续随访观察5年的结果显示,第1~4次CD4+T淋巴细胞检测结果分别为520、613、834、879个/μl,后续随访22次CD4+T检测结果持续维持在高水平,中位数为895个/μl;除有2次随访未检测病毒载量,共有5次随访检测病毒载量超过1 000拷贝/ml,其余19次检测结果均低于1 000拷贝/ml。同源性分析结果显示,研究对象与性伴二感染的HIV型别均为HIV-1 CRF_01AE型,gag基因的相似度是97.5%,推断其为传染源,而研究对象约在2013年4月底与传染源最后1次无保护同性性行为时感染。结论  该感染者被发现时为HIV早期感染者;持续随访检测结果提示,该感染者属于长期不进展者。
关键词 :HIV;印迹法,蛋白质;病毒载量;HIV长期存活者
Confirmatory process and follow-up of 1 case with long-term HIV infection in Shandong
WangGuoyong,ZhuXiaoyan,ZhangNa,SunXiaoguang,LinBin,HaoLianzheng,SuShengli,TaoXiaorun,KangDianmin     
Department of AIDS Prevention and Control, Shandong Provincial Center for Disease Control and Prevention, Jinan 250014, China
Corresponding author: Kang Dianmin, Email: dmkang66@163.com
Abstract:Objective  To describe the confirmation process and long-term follow-up results of 1 case of HIV with long term progression.Methods  The subject was a HIV infected man aged 27 years old. The first HIV antibody positive was detected by ELISA in August 7th, 2013. Close contacts were identified as 3 homosexual partners who had been contacted before infection and the first sexual partner had been unable to get in touch. Adopting the first epidemiological survey questionnaire of AIDS comprehensive prevention and control information system in China, the investigators conducted face-to-face surveys on the general demographic characteristics and behavioral characteristics of the subject. After the first ELISA test result was positive, 4 rapid detections of colloid selenium, ELISA, western-blot, CD4+T and viral load test were followed up (August 14th, 21st, 30th and September 16th, 2013). Long term follow-up was performed to detect CD4+T and viral load to observe the progress of the case after the diagnosis of infection.Results  The duration of sexual behavior was from 2011 to 2012 between the subject and his 1st sexual partner. During the study, repeated HIV antibody ELISA test results were negative. Sexual behavior maintained from January to April 2013 between the subject and his 2nd partner and the last one unprotected homosexual acts took place in April 2013. After the traceability survey, the 2nd sexual partner was an AIDS patient who had antiretroviral therapy in the anti HIV treatment module of AIDS comprehensive prevention information system. The subject and his 3rd partner maintained their sexual behavior from May to October 2013. The two ELISA tests of the 3rd partner were negative. Because of the need for hospital operation in August 7, 2013, the subject was tested for HIV antibody by ELISA and the result was positive while western blot test showed that the HIV-1 antibody was not confirmed (band type was gp160/gp120/p24). In the subsequent follow-up, 4 rapid detections of colloid selenium, ELISA and western-blot were conducted and all the results were positive (western-blot band type was gp160/gp120/gp41/p24/p17). Results of continuous follow-up for 5 years showed that the first four CD4+T cell counts were as follows: 520, 616, 834, 879. The following 22 CD4+T counts sustained at a high level and the median was 895 cells/μl. A total of 5 follow-up visits were conducted to detect viral load exceeding 1 000 copies/ml and the remaining 19 test results were lower than 1 000 copies/ml except that no viral load was detected in 2 follow-up visits. The result of homology analysis showed that the HIV types of the case and its 2nd sexual partner were all HIV-1 CRF_01AE. The similarity of gag region gene was 97.5%. So we inferred that the 2nd sexual partner was its source of infection, and the case was infected at the end of April 2013 with the last unprotected homosexual behavior.Conclusion  The infected person was found to be an early HIV infection. Continuous follow-up test results indicated that the case belonged to a HIV long-term nonprogressor.
Key words :HIV;Immunoblotting;Viral load;HIV long-term survivors
全文

艾滋病是由HIV引起的一种重大传染病,Western blot检测血液中HIV抗体是我国艾滋病诊断的实验室依据,核酸检测是辅助诊断依据。而在早期HIV感染者和艾滋病患者中有极少一部分病例会出现Western blot阳性而核酸检测阴性的结果,这部分感染而长期不进展者的疾病进程机制,可为众多艾滋病一般感染者的临床治疗和预防疫苗的研制提供借鉴[1];同时此类病例极少且很难在感染的早期监测网络发现,因此在临床上此类病例具有较高的科学研究价值。本研究在开展艾滋病早期感染者筛查以及早期抗病毒治疗效果观察的过程中发现了1例Western blot实验阳性而病毒载量阴性的早期感染病例,遂对其进行了长期随访观察。现将结果阐述如下。

对象与方法  

一、对象  研究对象为1例27岁男性HIV感染者,2013年8月14日第一次Western blot确证阳性。密切接触者为研究对象确证感染前接触过的3个同性性伴,其中性伴一已无法取得联系。本研究通过了山东省疾病预防控制中心伦理委员会审核(批号:2014063),研究对象及其性伴均签署了知情同意书。

二、问卷调查  采用中国艾滋病综合防治信息系统首次流行病学调查问卷,由调查员对研究对象的一般人口学特征及行为学特征等内容进行面对面调查。主要包括:研究对象的年龄、性别、民族、籍贯、居住地、高危行为情况等。

三、试剂与仪器  

1.试剂:  HIV1+2型抗体诊断试剂盒(胶体硒法)购自美国雅培公司(批号:48778K100);HIV1+2及抗原(HIV1P24)联合检测试剂盒(酶联免疫法)购自梅里埃(上海)生物制品有限公司(批号:20130503);HIV1+2型抗体检测试剂盒(Western blot)购自MP生物医学亚太私人有限公司(批号:AE3019);CD3/CD8/CD45/CD4四色荧光单克隆抗体购自美国BD公司(批号:30652);HIV-1核酸定量检测试剂盒(分子信标实时扩增检测法)NucliSENS EasyQ HIV-1 v2.0购自生物梅里埃公司(批号:13032702),最低检测限为50拷贝/ml;QIAamp Viral RNA Mini kit病毒亚型测定核酸提取试剂购自德国Qiagen公司(批号:142358566);PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2逆转录试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司(批号:AK3002);TaKaRa Ex Taq扩增试剂购自宝生物工程(大连)有限公司(批号:KA6101BA)。

2.仪器:  PHOMO酶标仪购自郑州安图生物工程股份有限公司;温控型全自动免疫印迹仪BeeBlot48购自上海英旻泰生物技术有限公司;BD FA CSCANTOⅡ流式细胞仪购自美国BD公司;EasyQ病毒载量仪购自生物梅里埃公司。

四、实验室检测  在首次ELISA检测(2013年8月7日)结果呈阳性后,分别于2013年8月14、21、30日和9月16日,对研究对象进行4次随访,每次随访均进行胶体硒法快速检测、ELISA检测、Western blot检测、CD4+T淋巴细胞检测和病毒载量检测;在研究对象确诊感染HIV后,对其进行长期随访检测CD4+T淋巴细胞和病毒载量,观察研究对象的病程进展。胶体硒法、ELISA、Western blot、CD4+T淋巴细胞检测和核酸检测病毒载量按照试剂说明书及《全国艾滋病检测技术规范(2009年版)》(2015年以后的结果按照2015年修订版)[2]进行。对性伴进行ELISA检测,若呈阳性,则进行Western blot确证实验;若阴性,不再进行检测。对Western blot确证实验阳性的性伴,通过艾滋病综合防治信息系统病例报告模块和随访管理模块进行感染情况核实和随访结果溯源,之后对研究对象及Western blot确证阳性的性伴进行病毒亚型检测同源性分析,以确定传染源。

五、HIV感染的判定  对HIV抗体ELISA检验呈阳性,而Western blot检测结果为不确定的受检者,继续随访并定期进行胶体硒法、ELISA法和Western blot法检测,直至Western blot抗体阳转,表明确定感染HIV。如果连续4次Western blot抗体未阳转,终止随访检测。

结果  

一、HIV感染确证过程及性行为史  

1.HIV感染确证过程:  研究对象于2013年8月7日因医院手术进行ELISA HIV抗体检测,结果呈阳性,血样送聊城市疾病预防控制中心筛查中心实验室复核,ELISA复核结果仍为阳性。于2013年8月7日至9月16日间先后分别进行5次HIV抗体快速检测、ELISA检测和Western blot确证检测,4次CD4+T淋巴细胞检测和4次病毒载量检测,第二次Western blot确证实验结果呈阳性。

2.性行为史:  (1)性伴一:维持性行为时间为2011—2012年,其间连续多次HIV抗体ELISA检测结果均阴性。(2)性伴二:维持性行为时间为2013年1—4月,其间最后1次无保护性行为发生于2013年4月;经溯源调查,性伴二为艾滋病综合防治信息系统抗病毒治疗模块中已进行抗病毒治疗的艾滋病患者。(3)性伴三:维持性行为时间为2013年5—10月,其间仅在7月份发生过1次有保护的同性性行为,其余均为无保护性行为,性伴三的两次ELISA检测均阴性。

二、实验室检测  

1.HIV抗体检测:  2013年8月7日,HIV抗体快速检测结果呈阳性,ELISA检测结果呈阳性,吸光度值(A)/临界值(CO)=23.9,Western blot确证结果为HIV-1抗体不确定(带型为gp160/gp120/p24)。其余4次血样,HIV抗体快速检测均阳性,ELISA检测均阳性(A/CO值分别为27.7、22.6、24.8和27.7),Western blot确证结果均为HIV-1抗体阳性(带型均为gp160/gp120/gp41/p24/p17)。见表1

表1研究对象实验室随访检测结果

2.CD4+T淋巴细胞检测:  8月14日至9月16日,4次CD4+T淋巴细胞检测结果分别为520、613、834、879个/ul。见表1

3.HIV载量检测:  8月14日至9月16日,4次病毒载量检测结果均在检测限以下(<50拷贝/ml)。见表1

三、感染时间判定  同源性分析结果显示,感染者与性伴二感染的HIV型别均为HIV-1 CRF_01AE型,GAG区基因的相似度是97.5%,两毒株在同一支上的可信度为99%。推断研究对象应为2013年4月底的最后1次无保护同性性行为时感染,至8月14日Western blot检测结果HIV抗体阳性,感染时间约为90~120 d,为早期HIV感染者。感染者被感染时,传染源处于治疗期而且病毒载量极低,为57拷贝/ml左右。

四、持续随访检测结果  对研究对象5年的持续随访检测,CD4+T淋巴细胞一直保持在500个/μl及以上,病毒载量只有5次结果>1 000拷贝/ml,其余19次的病毒载量检测结果一直维持在<1 000拷贝/ml。见表2

表2研究对象持续随访检测CD4+T淋巴细胞和HIV载量结果

五、传染源溯源调查  

1.传染源诊断过程:  传染源为性伴二,具有男男性行为史,已婚有配偶,有性病史。2010年6月实验室确诊感染HIV,2010年7月首次CD4+T淋巴细胞计数为420个/μl,2011年7月为35个/μl,诊断为艾滋病患者,2011年8月开始服用抗病毒治疗药物齐多夫定/拉米夫定、奈韦拉平。自确证感染HIV至CD4+T淋巴细胞计数降至35个/μl期间,无任何临床不适表现。自抗病毒治疗后CD4+T淋巴细胞持续上升,病毒载量保持在低水平或低于检测限,治疗效果较好。

2.实验室检测结果:  传染源自2010年6月开始随访,自2011年8月开始治疗,至2013年6月共检测CD4+T淋巴细胞9次、HIV病毒载量3次,结果显示CD4+T淋巴细胞逐步上升,病毒载量保持在较低水平。见表3

表3研究对象性伴二随访检测CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和HIV载量结果

讨论  Western blot实验是国际公认的判定HIV抗体结果的"金标准",是HIV感染实验室诊断的主要依据。而HIV核酸检测,主要用于HIV感染窗口期时的早期诊断和18个月以内婴幼儿的诊断[3]。HIV抗体检测窗口期为14~84 d[4],大部分病例窗口期在3~8周[5,6],HIV核酸检测将缩短窗口期。早期感染HIV后,首先出现的病毒标志物是病毒核酸和抗原[7],因此,通常情况下,在Western blot检测HIV抗体阳性后,核酸检测应为阳性(病毒载量>50拷贝/ml)。本例受检者在抗体阳转前后的3次病毒载量检测均未检测到病毒核酸,较为罕见。Okulicz等[8]报道显示,抗体确证阳性而病毒载量低于检测限的所谓精英控制者的感染率为0.55%,在所有感染者中占比5%左右;而7年长期不进展者的比例为3.32%、10年长期不进展者比例为2.04%。江苏省曾报道发现1例新发感染病例,其Western blot检测结果HIV抗体阳性而病毒载量测不到[9],国外也曾有血浆病毒载量检测带来HIV感染误诊的报道[10]。还有文献报道Western blot检测的假阳性率为0.000 6%[11],国内曾有Western blot阳性而病毒载量一直阴性而最后判为Western blot假阳性的病例报道[12]。为防止出现假阳性、误诊结果,本研究中病例连续进行了4次Western blot实验,结果带型一致,证明感染HIV无误。早期感染者病毒载量的多少与急性期感染症状的严重性密切相关[13],本例早期感染者没有出现急性期感染症状,也与测不到病毒载量的情况一致,这种早期感染不出现急性期感染症状的病例比例有多大,文献未见报道。有研究显示,艾滋病传染源在病毒载量很低的情况下传染性很小[14],但本研究对象被传染时传染源正处于病毒载量很低的时段。针对该研究对象的这种特殊性,对该研究对象进行了持续随访检测观察,发现该病例CD4+T淋巴细胞长期保持在较高水平,病毒载量维持在较低水平,对其随访调查也没有出现艾滋病相关的临床症状,提示该病例属于长期不进展者。国内有对长期不进展者病程进展、病例特征及耐药方面的研究[15,16]。长期不进展者的HIV自发病毒控制机制可能为临床治疗和疫苗研发提供十分有益的思路[1]。在知情同意原则上,该病例截至目前没有服用艾滋病抗病毒治疗药物。

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